Analysis of interaction of protein acatyltransferase CyaC and acyl domain of Adenylate Cyclase Toxin (ACT) from Bordetella pertussis using two-hybrid assay
Project goals
Posttransitional modification (maturation) of adenylate cyclase toxin (ACT) from Bordetella perussis is necessary for its cell-invasive (cytotoxic generation of cAMP) and hemolytic (pore-forming) activities. The acyltransferase CyaC is co-expressed withACT and plays an important role in the process of maturation of AC toxin. Together with acyl-acyl carrier protein (acyl-ACP) that serves as donor of fatty acyl group, it catalyzes transfer of the palmitoyl residue on the s-amino group of one of the two modified lysine residues of ACT, Lys860 and Lys983, respectively. A new bacterial two hybrid system will allow to test interaction between CyaC and the parts of ACT containing the acylated lysine residues (acyl domain, 400-1706 aa). Using various mutantsof the acyl domain of ACT, carrying substitution in either both, or only one of the Lys860 and Lys983 residues will enable the study the protein-protein interaction underlying the process of acylation performed by CyaC on ACT, with the participation of a
Keywords
Public support
Provider
Czech Science Foundation
Programme
Standard projects
Call for proposals
Standardní projekty 1 (SGA02002GA-ST)
Main participants
Mikrobiologický ústav AV ČR, v. v. i.
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
—
Alternative language
Project name in Czech
Analýza interakce protein acetyltransferasy CyaC s acylační doménou Adenylát Cyklásového Toxinu (ACT) z Bordetella pertussis pomocí "two-hybrid" metody
Annotation in Czech
Adenylát cyklásový toxin (ACT) je syntetizován v neaktivní formě (pro ACT) a pro jeho aktivaci je nezbytná postranslační úprava - acylace epsilon-aminové skupiny lysinu v pozici 983 popř. 860. Maturovaný toxin pak vykazuje invazivní adenylát cyklasovou aktivitu (konverze ATP na cAMP) a hemolytickou (pór tvořící) aktivitu. Proces acylace probíhá za účasti acyltransferasy CyaC, která je syntetizována současně s proACT, přičemž donorem acylové skupiny je acyl-ACP (acyl-acyl carrier protein). V prvním kroktohoto procesu dochází k nekovaletní vazbě CyaC-acyl-ACP, což vyvolá konformační změnu v molekule CyaC a vytvoření vazebného místa pro substrát proACT. Ve druhém kroku proACT interaguje s CyaC-acyl-ACP za vzniku ternárního komplexu. Nově zkonstruovaný "two hybrid" systém umožňuje studovat in vivo interakce protein-protein v adenylát cykláse deficientním kmeni Escherichia coli. Bude připravena řada mutant části ACT obsahující acylační doménu (400-1706 AK) se substituovanými aminokyselinovými zbytky Lys
Scientific branches
R&D category
—
CEP classification - main branch
EB - Genetics and molecular biology
CEP - secondary branch
EC - Immunology
CEP - another secondary branch
EE - Microbiology, virology
10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10606 - Microbiology
10607 - Virology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
30101 - Human genetics
30102 - Immunology
Completed project evaluation
Provider evaluation
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Project results evaluation
Projekt byl předčasně ukončen na žádost řešitelky (odchod z pracoviště). Přes nenaplnění dvou dílčích cílů lze projekt hodnotit jako úspěšně splněný s podstatným vědeckým přínosem. Výsledky řešení projektu byly prezentovány na dvou konferencích a jsou př
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2000
Realization period - end
Jan 1, 2003
Project status
S - Stopped (prematurely terminated) multi-year project
Latest support payment
—
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP/2002/GA0/GA02GA/U/N/7:3
Data delivery date
Apr 1, 2003
Finance
Total approved costs
351 thou. CZK
Public financial support
288 thou. CZK
Other public sources
84 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Basic information
Recognised costs
351 CZK thou.
Public support
288 CZK thou.
82%
Provider
Czech Science Foundation
CEP
EB - Genetics and molecular biology
Solution period
01. 01. 2000 - 01. 01. 2003