Application of fluorescence methods to estimate the role of potassium transporters in the regulation of membrane potential and intracellular pH of yeast cells
Project goals
It is believed that potassium transport systems play a role in many physiological processes of yeast cells, including the regulation of intracellular cation content, tolerance to osmolytes (and thus regulation of cellular volume), pH, membrane potentialand cell cycle. However, it is not easy to obtain direct experimental evidence about the transporters role in the regulation of membrane potential and intracellular pH. The mail goal of this project is establishing a new method of fluorescence spectroscopy of cellular pH and membrane potential, using the diS-C3(3) fluorescence probe and a fluorescence protein called pHluorin at a new spectrofluorometer ISS PC1. For this purpose we will use our own series of Saccharomyces cerevisiae mutant strains (and perhaps also other yeasts) differing in the expression of various potassium transport systems.
Keywords
Saccharomyces cerevisiaeintracellular pHpotassium cations transportmembrane potentialdiS-C3(3) fluorescence probepHluorin
Public support
Provider
Academy of Sciences of the Czech Republic
Programme
The research grant projects for juniors
Call for proposals
Juniorské badatelské grantové projekty 5 (SAV02007-B)
Main participants
—
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
KJB500110701
Alternative language
Project name in Czech
Využití fluorescenčních metod pro stanovení úlohy transportních systémů K+ v regulaci membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH kvasinek
Annotation in Czech
Předpokládá se, že transportní systémy draselných kationtů se v buňkách kvasinek podílejí na celé řadě fyziologických procesů od regulace vnitrobuněčného obsahu kationtů přes zajištění tolerance k osmoticky aktivním látkám (a tím na regulaci buněčného objemu), regulaci pH a membránového potenciálu, až po průběh buněčného cyklu. Přímé experimentální důkazy pro účast transportních systémů na regulaci membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH je však poměrně obtížné získat. Hlavním cílem předkládaného projektu je zavedení metody měření membránového potenciálu pomocí fluorescenční sondy diS-C3(3) a měření vnitrobuněčného pH pomocí fluorescenčního proteinu "pHluorin" na spektrofluorimetru ISS PC1 v námi vytvořené sérii mutantních kmenů Saccharomyces cerevisiae (případně dalších kvasinek) lišících se v expresi jednotlivých transportních systémů pro draselné kationty.
Scientific branches
R&D category
ZV - Basic research
CEP classification - main branch
EB - Genetics and molecular biology
CEP - secondary branch
—
CEP - another secondary branch
—
10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
30101 - Human genetics
Completed project evaluation
Provider evaluation
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Project results evaluation
New methods of measuring changes in membrane potential an intracellular pH were established in Inst. Physiol. These methods were used for better characterization of membrane cation transporters. Results were published in three papers with IF.
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2007
Realization period - end
Dec 31, 2009
Project status
U - Finished project
Latest support payment
Apr 28, 2009
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP10-AV0-KJ-U/03:3
Data delivery date
Jun 14, 2011
Finance
Total approved costs
1,349 thou. CZK
Public financial support
1,349 thou. CZK
Other public sources
0 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Basic information
Recognised costs
1 349 CZK thou.
Public support
1 349 CZK thou.
100%
Provider
Academy of Sciences of the Czech Republic
CEP
EB - Genetics and molecular biology
Solution period
01. 01. 2007 - 31. 12. 2009