Novel Tools for Cell Cycle Analysis
Project goals
The determination of the cell proliferation activity is a basic methodological approach for the evaluation of the cell population conditions in many situations e.g. in the evaluation of the genotoxicity or in the analysis of the effect of agents with an anti-tumour effect. The aim of the project presented is the development of new detection kits for the determination of cell proliferation based on the new non-destructive approaches for the revelation of incorporated BrdU in cellular DNA.
Keywords
5-bromo-2'-deoxyuridine5-ethynyl-2'-deoxycytidinecell proliferation activityflow cytometry analysis of cell populationsoxidative removal of shielded nucleoside
Public support
Provider
Technology Agency of the Czech Republic
Programme
Programme of applied research and experimental development ALFA
Call for proposals
ALFA 3 (STA02013TA03)
Main participants
—
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
2013TA03010719
Alternative language
Project name in Czech
Nové nástroje pro analýzu buněčného cyklu
Annotation in Czech
Stanovení proliferační buněčné aktivity představuje základní metodický přístup pro posouzení stavu buněčných populací v řadě situací. Uplatňuje se např. při posuzování genotoxicity nebo při analýze vlivu látek s protirakovinným účinkem. Existuje několik základních přístupů pro její stanovení. Nejpřesnějším přístupem je detekce syntézy DNA v analyzovaných buňkách. Tato detekce je nejčastěji založena na inkorporaci a následné vizualizaci 5-bromo-2'-deoxyuridinu (BrdU) nebo 5-etynyl-2'-deoxyuridinu (EdU), případně 5-etynyl-2'-deoxycytidinu (EdC). Nevýhodou přístupu používajícímu BrdU je nutnost použití kroků, které zpravidla vedou k destrukcím a/nebo k uvolnění buněčných složek a jejich re-distribuci. To znemožňuje současnou efektivní detekci těchto složek. Nevýhodou použití EdU a EdC je fakt, že vykazují vysokou toxicitu a rovněž fakt, že v případě nutnosti použití EdU a BrdU v jediném experimentu většina anti-BrdU protilátek efektivně reaguje nejen s BrdU ale i s EdU. Cílem předkládaného projektu je vytvoření nových detekčních souprav pro stanovení buněčné proliferace. Ty budou založeny na nových nedestruktivních přístupech pro odhalení BrdU v buněčné DNA. Těžištěm je pak vývoj souprav pro průtokovou analýzu buněčných populací. Východiskem jsou dva průmyslově chráněné přístupy. Ty byly vyvinuty v roce 2011 ve spolupráci pracovníků dvou řešitelských pracovišť. První z nich je založen na oxidativním odstranění clonícího nukleosidu a následné detekci BrdU v řetězcích DNA, druhý přístup je založen na použití malých nefluoreskujících molekul pro potlačení reaktivity anti-BrdU protilátek s EdU. Vedle aplikace uvedených průmyslově chráněných přístupů pro vývoj souprav pro detekci buněčné proliferace budou vyvíjeny další alternativní cesty nedestruktivní detekce BrdU. Důvodem je snaha o další zefektivnění a zkvalitnění souprav pro detekci proliferační buněčné aktivity, které umožní současné použití technologie založené na fluorescenčních proteinech typu GFP.
Scientific branches
R&D category
AP - Applied research
CEP classification - main branch
EI - Biotechnology and bionics
CEP - secondary branch
CC - Organic chemistry
CEP - another secondary branch
EA - Morphology and cytology
10401 - Organic chemistry
10601 - Cell biology
10602 - Biology (theoretical, mathematical, thermal, cryobiology, biological rhythm), Evolutionary biology
20801 - Environmental biotechnology
20802 - Bioremediation, diagnostic biotechnologies (DNA chips and biosensing devices) in environmental management
20803 - Environmental biotechnology related ethics
20901 - Industrial biotechnology
20902 - Bioprocessing technologies (industrial processes relying on biological agents to drive the process) biocatalysis, fermentation
20903 - Bioproducts (products that are manufactured using biological material as feedstock) biomaterials, bioplastics, biofuels, bioderived bulk and fine chemicals, bio-derived novel materials
30401 - Health-related biotechnology
30402 - Technologies involving the manipulation of cells, tissues, organs or the whole organism (assisted reproduction)
30403 - Technologies involving identifying the functioning of DNA, proteins and enzymes and how they influence the onset of disease and maintenance of well-being (gene-based diagnostics and therapeutic interventions [pharmacogenomics, gene-based therapeutics])
30404 - Biomaterials (as related to medical implants, devices, sensors)
30405 - Medical biotechnology related ethics
40401 - Agricultural biotechnology and food biotechnology
40402 - GM technology (crops and livestock), livestock cloning, marker assisted selection, diagnostics (DNA chips and biosensing devices for the early/accurate detection of diseases) biomass feedstock production technologies, biopharming
40403 - Agricultural biotechnology related ethics
Completed project evaluation
Provider evaluation
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Project results evaluation
Outputs and results have been achieved in accordance with the Treaty/decision to provide targeted support or valid amendment of this contract.
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2013
Realization period - end
Dec 31, 2015
Project status
U - Finished project
Latest support payment
Mar 11, 2014
Data delivery to CEP
Confidentiality
C - Předmět řešení projektu podléhá obchodnímu tajemství (§ 504 Občanského zákoníku), ale název projektu, cíle projektu a u ukončeného nebo zastaveného projektu zhodnocení výsledku řešení projektu (údaje P03, P04, P15, P19, P29, PN8) dodané do CEP, jsou upraveny tak, aby byly zveřejnitelné.
Data delivery code
CEP16-TA0-TA-U/04:1
Data delivery date
Feb 2, 2017
Finance
Total approved costs
9,600 thou. CZK
Public financial support
6,000 thou. CZK
Other public sources
0 thou. CZK
Non public and foreign sources
3,600 thou. CZK
Recognised costs
9 600 CZK thou.
Public support
6 000 CZK thou.
0%
Provider
Technology Agency of the Czech Republic
CEP
EI - Biotechnology and bionics
Solution period
01. 01. 2013 - 31. 12. 2015