Kit for determination of proteolytic activity of collagenase

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00023001%3A_____%2F20%3A00084469" target="_blank" >RIV/00023001:_____/20:00084469 - isvavai.cz</a>

Alternative codes found

RIV/25687191:_____/20:N0000001

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Kit pro stanovení proteolytické aktivity kolagenázy

Original language description

Kolagenázy jsou enzymy patřící mezi metaloproteinázy, které rozkládají kolagen a tím se účastní rozkladu extracelulárního matrix. Kolagen je široce rozšířený strukturní protein přítomný v pojivových tkáních. Kolagenázy se využívají klinicky pro léčbu Dupuytrenovy kontraktury, Peyronieovy choroby a při léčbě špatně hojících se ran, kde se používají pro odstranění nekrotické tkáně. V současnosti jsou kolagenázy také využívány při izolaci Langerhansových 15 ostrůvků, které se dají využít k léčbě diabetu. Kolagenázy se izolují například z bakteriálního kmene Clostridium histolyticum. Tato bakterie je produkuje přirozeně do svého okolí zároveň s mnoha dalšími enzymy se schopností natrávit živočišné tkáně a tím podpořit svojí patogenezi. Účinnost kolagenázy štěpit kolagen je možné kvantifikovat hodnotou aktivity tohoto enzymu. V praxi se v laboratořích pro stanovení aktivity kolagenáz využívá metod, které můžeme rozdělit na tři hlavní směry. První směr je založen na pozorování změn ve fyzikálních vlastnostech kolagenu po degradaci jako je například viskozita. V druhém směru můžeme nalézt metody založené na specifických reakcích produktu vycházejících z enzymatických reakcí, jako jsou: hydroxyprolin, aminokyseliny, peptidy. Bohužel všechny tyto metody jsou velmi časově 25 náročné 3 až 18 h a mnohdy vyžadují práci s nebezpečnými látkami. Třetí směr zahrnuje metody, založené na využití radio nebo fluorescenčně značeném kolagenu. Běžně se kolagen značí: 14C; 2H nebo 3H; Nevýhodou je, že metody založené na radioznačení jsou bohužel závislé na nákladném vybavení pro měření a zároveň se při měření generuje 30 radioaktivní odpad. Kolagen se dá také fluorescenčně označit biotinem, nicméně tento přístup je časově náročný a také nákladný, jelikož vyžaduje separaci navázaného a nenavázaného markeru, také výtěžky jsou obecně nízké. Pro kolagenázy produkované bakterií Clostridium histolyticum byla vyvinuta metoda měření 35 aktivity založená na hydrolýze 2-furanakryloyl-L-leucylglycyl-L-prolyl-L-alaninu (FALGPA). FALGPA je hydrolyzována kolagenázou rychleji než jakýkoli jiný běžně používaný syntetický substrát a zároveň není štěpena žádnou ze známých proteináz, jako je trypsin, termolysin nebo elastáza. Samotný test je rychlý, pohodlný a citlivý.

Czech name

Kit pro stanovení proteolytické aktivity kolagenázy

Czech description

Kolagenázy jsou enzymy patřící mezi metaloproteinázy, které rozkládají kolagen a tím se účastní rozkladu extracelulárního matrix. Kolagen je široce rozšířený strukturní protein přítomný v pojivových tkáních. Kolagenázy se využívají klinicky pro léčbu Dupuytrenovy kontraktury, Peyronieovy choroby a při léčbě špatně hojících se ran, kde se používají pro odstranění nekrotické tkáně. V současnosti jsou kolagenázy také využívány při izolaci Langerhansových 15 ostrůvků, které se dají využít k léčbě diabetu. Kolagenázy se izolují například z bakteriálního kmene Clostridium histolyticum. Tato bakterie je produkuje přirozeně do svého okolí zároveň s mnoha dalšími enzymy se schopností natrávit živočišné tkáně a tím podpořit svojí patogenezi. Účinnost kolagenázy štěpit kolagen je možné kvantifikovat hodnotou aktivity tohoto enzymu. V praxi se v laboratořích pro stanovení aktivity kolagenáz využívá metod, které můžeme rozdělit na tři hlavní směry. První směr je založen na pozorování změn ve fyzikálních vlastnostech kolagenu po degradaci jako je například viskozita. V druhém směru můžeme nalézt metody založené na specifických reakcích produktu vycházejících z enzymatických reakcí, jako jsou: hydroxyprolin, aminokyseliny, peptidy. Bohužel všechny tyto metody jsou velmi časově 25 náročné 3 až 18 h a mnohdy vyžadují práci s nebezpečnými látkami. Třetí směr zahrnuje metody, založené na využití radio nebo fluorescenčně značeném kolagenu. Běžně se kolagen značí: 14C; 2H nebo 3H; Nevýhodou je, že metody založené na radioznačení jsou bohužel závislé na nákladném vybavení pro měření a zároveň se při měření generuje 30 radioaktivní odpad. Kolagen se dá také fluorescenčně označit biotinem, nicméně tento přístup je časově náročný a také nákladný, jelikož vyžaduje separaci navázaného a nenavázaného markeru, také výtěžky jsou obecně nízké. Pro kolagenázy produkované bakterií Clostridium histolyticum byla vyvinuta metoda měření 35 aktivity založená na hydrolýze 2-furanakryloyl-L-leucylglycyl-L-prolyl-L-alaninu (FALGPA). FALGPA je hydrolyzována kolagenázou rychleji než jakýkoli jiný běžně používaný syntetický substrát a zároveň není štěpena žádnou ze známých proteináz, jako je trypsin, termolysin nebo elastáza. Samotný test je rychlý, pohodlný a citlivý.

Type

F_uzit - Utility model

CEP classification

—

OECD FORD branch

10608 - Biochemistry and molecular biology

Project

<a href="/en/project/FV20139" target="_blank" >FV20139: Biotechnologically customised collagenase for preparation of advanced therapy medicinal products</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2020

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Patent/design ID

33846

Publisher

CZ001 -

Publisher name

Industrial Property Office

Place of publication

Prague

Publication country

CZ - CZECH REPUBLIC

Date of acceptance

—

Owner name

MB PHARMA s.r.o., FAGOFARMA s.r.o., Institut klinické a experimentální medicíny

Method of use

A - Výsledek využívá pouze poskytovatel

Usage type

P - Využití výsledku jiným subjektem je v některých případech možné bez nabytí licence