Intracellular cytokine detection by flow cytometry in pigs: Fixation, permeabilization and cell surface staining

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F07%3A%230000225" target="_blank" >RIV/00027162:_____/07:#0000225 - isvavai.cz</a>

Alternative codes found

RIV/67985904:_____/07:00319695

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Intracellular cytokine detection by flow cytometry in pigs: Fixation, permeabilization and cell surface staining

Original language description

The aim of the study was to find the best procedure for fixation and permeabilization of porcine blood leukocytes and simultaneous cell surface staining. Permeabilization with commercial kits gave better results in most of the chosen parameters comparedwith combinations of different concentrations of paraformaldehyde and saponin. Among the commercial kits tested, the best results were obtained with the IntraStain kit. Cell surface markers were detected on cells stimulated for cytokine production by antibodies anti-CD14 (clone MIL-2), anti-SWC3, anti-CD4 and anti-CD8 except anti-CD14 (clone Tük4). While anti-CD8 (clone MIL-12) must be used for staining of unfixed cells, the other antibodies recognize fixed and/or permeabilized cells. The present studycan serve as a particular protocol of intracellular cytokine detection and as a suggestion for optimization of the fixation, permeabilization and cell surface staining procedure in any laboratory.

Czech name

Intracelulární detekce cytokinů u prasete průtokovou cytometrií: fixace, permeabilizace a značení povrchových molekul

Czech description

Cílem studie bylo najít nejlepší postup fixace a permeabilizace prasečích krevních leukocytů a simultánní značení povrchových molekul. Použití komerčních kitů k permeabilizaci vedlo k nejlepším výsledkům ve všech sledovaných parametrech ve srovnání s různými koncentracemi paraformaldehydu a saponinu. Mezi komerčními kity bylo nejlepších výsledků dosaženo při použití kitu IntraStain. Detekce povrchových znaků na buňkách stimulovaných k produkci cytokinů byla možná při použití protilátky proti CD14 (klonMIL-2, ale ne Tük4), SWC3, CD4 a CD8. Zatímco protilátka proti CD8 (klon MIL-12) musí být použita na nefixovaných buňkách, ostatní protilátky detekovaly povrchové molekuly i na fixovaných a/nebo permealilizovaných buňkách. Tato studie může sloužit částečně jako protokol pro intracelulární detekci cytokinů a zároveň jako doporučení k optimalizaci postupu fixace, permeabilizace a povrchového značení v jakékoliv laboratoři.

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

GJ - Diseases and animal vermin, veterinary medicine

OECD FORD branch

—

Project

—

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2007

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Journal of Immunological Methods

ISSN

0022-1759

e-ISSN

—

Volume of the periodical

327

Issue of the periodical within the volume

1

Country of publishing house

NL - THE KINGDOM OF THE NETHERLANDS

Number of pages

12

Pages from-to

18-29

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—