Optimization of the lymphocyte proliferation assay in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F19%3AN0000170" target="_blank" >RIV/00027162:_____/19:N0000170 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Optimalizace testu blastické transformace lymfocytů u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss)

Original language description

TOXCON 2019 (24th Interdisciplinary Toxicology Conference), Vyhne, Slovensko, 26. - 28. 6. 2019 – poster, abstrakt ve sborníku. Stav imunitního systému ryb může být posouzen funkčními imunologickými testy, které jsou často využívány i v toxikologických studiích. Během testu blastické transformace lymfocytů tyto buňky proliferují po stimulaci různými mitogeny a stávají se z nich lymfoblasty. Cílem této studie byla optimalizace této metody u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss). Vzorky zahrnovaly hlavovou ledvinu a periferní krev odebranou za použití různých antikoagulancií (heparin, EDTA). Mononukleární buňky byly izolovány centrifugací na denzitním gradientu. Izolované buňky byly inkubovány při 10–20°C s různými mitogeny (pokeweed mitogen 5, 10 a 50 µg.mL-1, konkanavalin A 1, 10 a 20 µg.mL-1, fytohemaglutinin 25, 50 a 100 µg.mL-1, lipopolysacharid 1, 50 a 100 µg.mL-1) a fetálním bovinním sérem nebo pstružím sérem. Po uplynutí inkubační doby (2–8 dnů) byl do buněčné suspenze přidán značený thymidin. Množství thymidinu inkorporovaného do nově vznikající DNA bylo následně změřeno přístrojem pro kapalnou scintilaci ve formě počtu záblesků za minutu (CPM). Nejvyšší hodnoty buněčné proliferace byly pozorovány u lymfocytů periferní krve (odebrané na heparin) po 7 dnech inkubace při 15 ° C s fetálním bovinním sérem. Nejlepší výsledky byly zaznamenány s fytohemaglutininem (100 µg.mL-1) u buněk hlavové ledviny a s pokeweed mitogenem (50 µg.mL-1) u buněk periferní krve (s nejvyššími hodnotami při použití heparinizované krve). Optimalizace tohoto testu rozšiřuje možnosti kvalitního posouzení stavu imunitního systému pstruha duhového.

Czech name

Optimalizace testu blastické transformace lymfocytů u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss)

Czech description

TOXCON 2019 (24th Interdisciplinary Toxicology Conference), Vyhne, Slovensko, 26. - 28. 6. 2019 – poster, abstrakt ve sborníku. Stav imunitního systému ryb může být posouzen funkčními imunologickými testy, které jsou často využívány i v toxikologických studiích. Během testu blastické transformace lymfocytů tyto buňky proliferují po stimulaci různými mitogeny a stávají se z nich lymfoblasty. Cílem této studie byla optimalizace této metody u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss). Vzorky zahrnovaly hlavovou ledvinu a periferní krev odebranou za použití různých antikoagulancií (heparin, EDTA). Mononukleární buňky byly izolovány centrifugací na denzitním gradientu. Izolované buňky byly inkubovány při 10–20°C s různými mitogeny (pokeweed mitogen 5, 10 a 50 µg.mL-1, konkanavalin A 1, 10 a 20 µg.mL-1, fytohemaglutinin 25, 50 a 100 µg.mL-1, lipopolysacharid 1, 50 a 100 µg.mL-1) a fetálním bovinním sérem nebo pstružím sérem. Po uplynutí inkubační doby (2–8 dnů) byl do buněčné suspenze přidán značený thymidin. Množství thymidinu inkorporovaného do nově vznikající DNA bylo následně změřeno přístrojem pro kapalnou scintilaci ve formě počtu záblesků za minutu (CPM). Nejvyšší hodnoty buněčné proliferace byly pozorovány u lymfocytů periferní krve (odebrané na heparin) po 7 dnech inkubace při 15 ° C s fetálním bovinním sérem. Nejlepší výsledky byly zaznamenány s fytohemaglutininem (100 µg.mL-1) u buněk hlavové ledviny a s pokeweed mitogenem (50 µg.mL-1) u buněk periferní krve (s nejvyššími hodnotami při použití heparinizované krve). Optimalizace tohoto testu rozšiřuje možnosti kvalitního posouzení stavu imunitního systému pstruha duhového.

Type

O - Miscellaneous

CEP classification

—

OECD FORD branch

40301 - Veterinary science

Project

Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2019

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů