Optimization of Recombinant Antigen Expression to Enhance Yield and Test the Stability and Specificity of These Proteins for Use in a Commercial ELISA Kit

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F24%3AN0000203" target="_blank" >RIV/00027162:_____/24:N0000203 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Optimalizace exprese rekombinantních antigenů pro zvýšení výtěžnosti a testování stability a specifity těchto proteinů pro použití v komerční ELISA soupravě

Original language description

Předkládaný funkční vzorek popisuje metodiku produkce dvou rekombinantních proteinů, jež jsou základem DIVA ELISA testu, který dokáže sérologicky rozlišit prasata vakcinovaná inaktivovanou vakcínou BioSuis Salm, chránící novorozená selata před salmonelovými infekcemi, od prasat infikovaných netyfoidními kmeny salmonel a od prasat negativních na přítomnost patogenu. Oba antigeny pocházejí z bakterie Salmonella Typhimurium a jsou exprimovány v expresním systému založeném na bakteriích Escherichia coli. Komerční ELISA souprava vyžaduje vysokou specifitu antigenů, ve smyslu rozlišení zmíněných tří skupin prasat, dostatečnou citlivost, ale také rozumnou míru nákladů na její přípravu, což zvyšuje konkurenceschopnost takovéto soupravy a v konečném důsledku i zmíněné vakcíny, která byla vyvinuta na pracovišti autorů. Základem produkce antigenů jsou dvě jednoduché purifikační metody, které umožňují přípravu dostatečně čistých rekombinantních proteinů ve velmi krátkém čase. Optimalizace všech kroků od návrhu konstruktu až po finální ELISA testování je pak stěžejní pro splnění všech zmíněných parametrů.

Czech name

Optimalizace exprese rekombinantních antigenů pro zvýšení výtěžnosti a testování stability a specifity těchto proteinů pro použití v komerční ELISA soupravě

Czech description

—

Type

G_funk - Functional sample

CEP classification

—

OECD FORD branch

40301 - Veterinary science

Project

<a href="/en/project/TQ03000656" target="_blank" >TQ03000656: Development of DIVA ELISA test distinguishing pigs infected by non-typhoid Salmonella serotypes and pigs vaccinated against these serotypes</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Publication year

2024

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Internal product ID

6758/2024

Numerical identification

—

Technical parameters

Podstatou funkčního vzorku je příprava dvou rekombinantních proteinů, jejichž využitím v ELISA metodě je možné sérologicky rozlišit prasata vakcinovaná od prasat infikovaných bakterií Salmonella Typhimurium. Základem pro přípravu těchto dvou antigenů je produkce v expresním systému Escherichia coli a následná izolace a purifikace dvěma metodami – afinitní chromatografie pomocí HisTagové kotvy a následná eluce z gelu po SDS-PAGE gelové elektroforéze. Celý tento proces je možné provést během 4-5 dní s vysokým výtěžkem a čistotou proteinu přesahující 90 %. Takto připravené antigeny jsou v ELISA testu stabilní nejméně po dobu 6 měsíců a s vysokou spolehlivostí jsou schopny sérologicky rozlišit zmíněné skupiny zvířat.

Economical parameters

Díky použitému expresnímu systému a zvoleným metodám purifikace a jejich optimalizací jsme schopni vyrobit oba antigeny v krátkém čase s vysokými výtěžky, vysokou čistotou a malou ztrátou materiálu, což snižuje náklady na jejich produkci. To se odrazí v ceně navazující ELISA soupravy a v konečném důsledku tak zvýší konkurenceschopnost takovéto soupravy, ale i využitelnost vakcíny BioSuis Salm (vyvinutou týmem autorů společně se společností Bioveta, a.s. do komerční podoby), která je s diagnostickým ELISA testem úzce propojená.

Application category by cost

—

Owner IČO

00027162

Owner name

Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i.

Owner country

CZ - CZECH REPUBLIC

Usage type

V - Výsledek je využíván vlastníkem

Licence fee requirement

Z - Poskytovatel licence na výsledek nepožaduje v některých případech licenční poplatek

Web page

—