Capillary electrophoresis-based nanoscale assays for monitoring ecto-5 '-nucleotidase activity and inhibition in preparations of recombinant enzyme and melanoma cell membranes

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F61989592%3A15310%2F08%3A00005793" target="_blank" >RIV/61989592:15310/08:00005793 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Capillary electrophoresis-based nanoscale assays for monitoring ecto-5 '-nucleotidase activity and inhibition in preparations of recombinant enzyme and melanoma cell membranes

Original language description

Powerful capillary electrophoresis (CE) methods were developed for monitoring the reaction of ecto-5'-nucleotidase (ecto-5'-NT, CD73), a (path o)biochemically important enzyme that hydrolyzes nucleo side- 5'-monophosphates to the corresponding nucleosides. The enzymatic reaction was performed either before injection into the capillary (method A) or directly within the capillary (method 13). In method A, separation of substrates and products was achieved within 8 min using an eCAP fused-silica capillary(20 cm effective length, 75 mu M i.d., UV detection at 260 nm), 40 mM sodium borate buffer (pH 9.1), normal polarity, and a constant voltage of 15 kV. In method B, the sandwich technique was applied; substrate dissolved in reaction buffer (10 mM Hepes [pH 7.4], 2 mM MgCl2, and 1 mM CaCl2) was hydrodynamically injected into a fused-silica capillary (30 cm, 75 M i.d.), followed by enzyme (recombinant rat ecto-5'-NT) and subsequent injection of substrate solution. The reaction was initi

Czech name

Kvantitativní nano zkoušky založené na kapilární elektroforéze pro monitorování ecto-5´-nukleotidasové aktivity a inhibice v přípravě rekombinovaných enzymů a melanomů buněčných membrán

Czech description

Byla vyvinuta účinná CE metoda pro monitorování reakce ecto-5´-nukleotidasy, patobiochemicky významného enzymu, který hydrolyzuje nukleosid-5´-monofosfáty na příslušné nukleosidy. Enzymatická reakce byla provedena buď před nastříknutím do kapiláry (metoda A) nebo přímo v kapiláře (metoda B). U metody A bylo dosaženo separace substrátů a produktů během 8 minut s využitím eCAP křemenné kapiláry (efektivní délka 20 cm, vnitřní průměr 75 um, UV detekce při 260 nm), 40 mM tlumivý roztok boritanu sodného o pH9,1, normální polarita a při konstantním napětí 15 kV. U metody B byla aplikována sendvičová technika: substrát byl rozpuštěn v reakčním tlumivém roztoku (10 mM Hepes o pH 7,4, 2 mM MgCl2 a 1 mM CaCl2) byl hydrodynamicky nastříknut do křemenné kapiláry(30 cm, vnitřní průměr 75 um) a dále následovalo nastříknutí enzymu.

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

CB - Analytical chemistry, separation

OECD FORD branch

—

Project

—

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2008

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Analytical Biochemistry

ISSN

0003-2697

e-ISSN

—

Volume of the periodical

373

Issue of the periodical within the volume

1

Country of publishing house

GB - UNITED KINGDOM

Number of pages

12

Pages from-to

—

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—