Increased expression of long non-coding RNA BTN2A3P contributes to the malignant glioblastoma phenotype

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F65269705%3A_____%2F21%3A00074750" target="_blank" >RIV/65269705:_____/21:00074750 - isvavai.cz</a>

Result on the web

<a href="https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/495.pdf" target="_blank" >https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/495.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

slovinština

Original language name

Zvýšená expresia dlhej nekódujúcej RNA BTN2A3P prispieva k malígnemu fenotypu glioblastomu

Original language description

Východiská: Dlhé nekódujúce RNA (lncRNA) sú významným regulátorom širokého spektra bunkových procesov. V zdravom tkanive vykazujú vysoko špecifické expresné profily. Dysregulácia lncRNA je predmetom štúdia u rady nádorov vrátane glioblastomu, ktorý je najčastejším primárnym malígnym nádorom mozgu. Podľa dát získaných z TCGA a nezávislej kohorty pacientov analyzovanej na našom pracovisku bola expresia BTN2A3P lncRNA v tkanivách glioblastomu zvýšená oproti normálnemu tkanivu. Funkcia tohoto transkriptu nebola zatiaľ popísaná. Materiál a metódy: Knockdown BTN2A3P lncRNA v bunečnej línii U251-MG bol docielený metódou CRISPR/Cas9 s využitím lentivírového represorového konštruktu dCas-KRAB v kombinácií s gRNA cieliacimi na pozície -22, +137 a +256 nt od miesta počiatku transkripcie. K tvorbe línií slúžiacich ako negatívna kontrola boli využité necieliace gRNA. Expresia BTN2A3P bola analyzovaná pomocou qRT-PCR (TaqMan Gene Expression Assay). Stabilita represie bola monitorovaná po dobu 16 pasáží. Línie boli podrobené panelu in vitro testov a analýze bunečného cyklu. Ortotopická xenotransplatácia do NOD scid gamma myší (n = 11) poslúžila k posúdeniu vplyvu miery expresie BTN2A3P na malígny fenotyp buniek in vivo. Výsledky: Expresia BTN2A3P sa vo vygenerovaných líniách líšila v závislosti na použitej gRNA. Pokles v efektivite represie so stúpajúcou pasážou poukazoval na možnú selekčnú výhodu klonov s vyššou hladinou BTN2A3P. U línie s najefektívnejšou represiou BTN2A3P (B3) bola pozorovaná nižšia schopnosť zakladať kolónie (p &lt; 0,05), oproti negatívnej kontrole. Analýza vzťahu medzi expresiou BTN2A3P a počtom kolónií odhalila pozitívnu koreláciu (p &lt; 0,05). Priemerná veľkosť nádorových ložisiek u myšieho ortotopického modelu sa medzi pokusnými skupinami nelíšila. V kontrolnej skupine došlo k rozvoju nádoru u všetkých myší, zatiaľ čo v skupine B3 tomu tak bolo len u 60 % jedincov. Pilotný experiment ukázal, že by sa BTN2A3P lncRNA mohla podieľať na regulácií expresie miR-34a-p5. Záver: Z našich experimentov vyplýva, že zvýšená expresia BTN2A3P sa podieľa na malignite glioblastomu in vitro. Výsledky pilotného experimentu na myšom ortotopickom modely naznačili, že zvýšená hladina BTN2A3P môže prispievať k schopnosti zakladať nádory in vivo. Molekulárny mechanizmus, prostredníctvom ktorého BTN2A3P reguluje génovú expresiu je v súčasnosti predmetom skúmania.

Czech name

—

Czech description

—

Type

O - Miscellaneous

CEP classification

—

OECD FORD branch

30212 - Surgery

Project

Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2021

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů