Ex vivo phenotyping and monitoring of CD19 CAR-T lymphocytes: experience of one center

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F65269705%3A_____%2F21%3A00075193" target="_blank" >RIV/65269705:_____/21:00075193 - isvavai.cz</a>

Result on the web

<a href="https://www.prolekare.cz/casopisy/transfuze-hematologie-dnes/archiv-cisel/2021-supplementum-2" target="_blank" >https://www.prolekare.cz/casopisy/transfuze-hematologie-dnes/archiv-cisel/2021-supplementum-2</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Ex vivo fenotypizace a monitoring CD19 CAR-T lymfocytů: zkušenosti jednoho centra

Original language description

Cíle: Adoptivní imunoterapie je terapeutickým přístupem, kdy se využívá geneticky modifikovaný produkt pacientových T-lymfocytů. Klinická relevance a celková efektivita závisí na mnoha faktorech, mj. na schopnosti CD19 CAR-T produktu expandovat a persistovat in vivo. Jednou z možností sledování CAR-T v organizmu je využití detekce CAR antigenu na povrchu lymfocytů pomocí průtokové cytometrie. Cílem práce bylo zavést spolehlivý protokol pro detekci CAR T-lymfocytů z periferní krve pomocí průtokové cytometrie, jako i standardní sledování zastoupení vybraných T-lymfocytárních subsetů, NK linie a míry deplece B linie v rámci sledování. Metody: Z periferní krve 21 pacientů byly izolovány leukocyty, které byly nejdříve primárně značeny CD19 CAR biotinem, sekundárně pak směsí specifických monoklonálních protilátek anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD45, streptavidin-Alexa647. T, B a NK linie ve vybraných časových rámcích byla detekována pomocí monoklonálních protilátek proti povrchovým antigenům CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD16/56, CD45. Imunoregulační index byl vypočítán jako poměr relativního zastoupení CD3+ T lymfocytů CD4+/CD8+. Vhodná gatovací strategie cílových populací byla optimalizována za využití negativních kontrol a odfiltrováním dalších možných falešně pozitivních interferencí (autofluorescence buněk, apoptické/nekrotické buňky, debris). Koncentrace CAR-T lymfocytů byla vyhodnocena z leukocytů jako počet buněk/μl. Výsledky: U pacientů se po podání CAR-T buněk mění zastoupení lymfocytárních subsetů CD4/CD8 v závislosti na čase od infuze. Nejvyšší expanze modifikovaných T-lymfocytů nastala dne 10-14 od podání, ale u části pacientů nebylo možné relevantní hodnocení (nízká buněčnost, hodnoty pod limitem detekce metody apod.). Nežádoucí účinky CAR-T terapie byly během hospitalizace hodnoceny dvakrát denně. Úspěšnost CAR-T terapie je hodnocena pomocí PET/CT. Výsledky budou publikovány ve finálním sdělení. Závěr: Metoda průtokové cytometrie je rychlou a efektivní metodou pro monitoraci expanze a persistence CAR T-lymfocytů v periferní krvi. Ve vhodně zvolených časových rámcích může být také jedním z nástrojů predikce nežádoucích účinků a efektu terapie.

Czech name

Ex vivo fenotypizace a monitoring CD19 CAR-T lymfocytů: zkušenosti jednoho centra

Czech description

Cíle: Adoptivní imunoterapie je terapeutickým přístupem, kdy se využívá geneticky modifikovaný produkt pacientových T-lymfocytů. Klinická relevance a celková efektivita závisí na mnoha faktorech, mj. na schopnosti CD19 CAR-T produktu expandovat a persistovat in vivo. Jednou z možností sledování CAR-T v organizmu je využití detekce CAR antigenu na povrchu lymfocytů pomocí průtokové cytometrie. Cílem práce bylo zavést spolehlivý protokol pro detekci CAR T-lymfocytů z periferní krve pomocí průtokové cytometrie, jako i standardní sledování zastoupení vybraných T-lymfocytárních subsetů, NK linie a míry deplece B linie v rámci sledování. Metody: Z periferní krve 21 pacientů byly izolovány leukocyty, které byly nejdříve primárně značeny CD19 CAR biotinem, sekundárně pak směsí specifických monoklonálních protilátek anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD45, streptavidin-Alexa647. T, B a NK linie ve vybraných časových rámcích byla detekována pomocí monoklonálních protilátek proti povrchovým antigenům CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD16/56, CD45. Imunoregulační index byl vypočítán jako poměr relativního zastoupení CD3+ T lymfocytů CD4+/CD8+. Vhodná gatovací strategie cílových populací byla optimalizována za využití negativních kontrol a odfiltrováním dalších možných falešně pozitivních interferencí (autofluorescence buněk, apoptické/nekrotické buňky, debris). Koncentrace CAR-T lymfocytů byla vyhodnocena z leukocytů jako počet buněk/μl. Výsledky: U pacientů se po podání CAR-T buněk mění zastoupení lymfocytárních subsetů CD4/CD8 v závislosti na čase od infuze. Nejvyšší expanze modifikovaných T-lymfocytů nastala dne 10-14 od podání, ale u části pacientů nebylo možné relevantní hodnocení (nízká buněčnost, hodnoty pod limitem detekce metody apod.). Nežádoucí účinky CAR-T terapie byly během hospitalizace hodnoceny dvakrát denně. Úspěšnost CAR-T terapie je hodnocena pomocí PET/CT. Výsledky budou publikovány ve finálním sdělení. Závěr: Metoda průtokové cytometrie je rychlou a efektivní metodou pro monitoraci expanze a persistence CAR T-lymfocytů v periferní krvi. Ve vhodně zvolených časových rámcích může být také jedním z nástrojů predikce nežádoucích účinků a efektu terapie.

Type

O - Miscellaneous

CEP classification

—

OECD FORD branch

30205 - Hematology

Project

—

Continuities

I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Publication year

2021

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů