A fast and simple dot-immunobinding assay for quantifiction of mouse immunoglobulins in hybridoma culture supernatants
The result's identifiers
Result code in IS VaVaI
<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F68378050%3A_____%2F04%3A00105288" target="_blank" >RIV/68378050:_____/04:00105288 - isvavai.cz</a>
Result on the web
—
DOI - Digital Object Identifier
—
Alternative languages
Result language
angličtina
Original language name
A fast and simple dot-immunobinding assay for quantifiction of mouse immunoglobulins in hybridoma culture supernatants
Original language description
Mouse monoclonal antibodies of IgG subclasses and IgM class in hybridoma culture supernatants were quantified using a dot-immunobinding assay. Immunoglobulins were bound to nitrocellulose (NC) membrane and, after blocking, the membrane was incubated withanti-mouse antibody conjugated to horseradish peroxidase (HRP). Binding was revealed by incubation with a sensitive chemiluminiscence reagent. Quantitation was achieved by densitometric comparison with standard curves produced by purified monoclonal antibodies of the same subclass or purified antibodies of the same clone as the antibody to be quantified. These quantitative results were compared with those obtained using purified IgG from mouse serum or purified mouse myeloma IgM as standards. The dot-immunobinding assay requires 1 l of hybridoma culture sample and takes about 1 h in total. Good linearity between the staining intensity and the amount of immobilized immunoglobulins was observed over the range of 0.05ů5 ng/spot. The as...
Czech name
Rychlý a jednoduchý imunovazebný test ("dot-immunobinding assay") pro kvantifikaci myších imunoglobulinů v supernatantech hybridomových kultur
Czech description
Pomocí testu "dot-immunobinding" byly kvantifikovány myší monoklonální protilátky imunoglobulinové podtřídy IgG a IgM v supernatantech hybridomových kultur. Imunoglobuliny byly navázány na nitrocelulózovou (NC) membránu a po blokování byla membrána inkubována s protilátkou proti myším konjugovanou s křenovou peroxidázou (HRP). Vazba byla odhalena inkubací s citlivým chemiluminiscenčním reagentem. Kvantifikace bylo dosaženo denzitometrickým srovnáním se standardními křivkami získanými reakcí purifikovaných monoklonálních protilátek téže podtřídy či purifikovanými protilátkami téhož klonu jako kvantifikovaná protilátka. Tyto kvantitativní výsledky byly srovnány s výsledky získanými pomocí purifikovaného IgG z myšího séra či purifikovaného IgM myšího myelomu jako standardu. Pro test "dot-immunobinding" je třeba 1 l vzorku hybridomové kultury a trvá celkem asi 1 h. Mezi intenzitou zbarvení a množstvím imobilizovaného imunoglobulinu byla zjištěna dobrá linearita v rozpětí 0,05 ng/skvrna....
Classification
Type
J<sub>x</sub> - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)
CEP classification
EB - Genetics and molecular biology
OECD FORD branch
—
Result continuities
Project
Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.
Continuities
P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)
Others
Publication year
2004
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data specific for result type
Name of the periodical
Journal of Immunological Methods
ISSN
0022-1759
e-ISSN
—
Volume of the periodical
289
Issue of the periodical within the volume
-
Country of publishing house
NL - THE KINGDOM OF THE NETHERLANDS
Number of pages
7
Pages from-to
89-95
UT code for WoS article
—
EID of the result in the Scopus database
—