Measurement of pH in model systems of liposomes by means of fluorescent probes using steady-state and time-resolved fluorescence techniques
Project goals
The main goal of this project is to develop new techniques for pH measurements in liposomes by means of fluorescent probes, including their application to the study of the proton pump of yeast in the proteoliposomes. Steady-state and time-resolved fluorescence studies in both pure and protein-loaded liposomes stained by selected fluorescent dyes will provide better insight into probe response variations due to the changes of the cell medium, occuring when going from buffer solutions to the cell environment. The investigation of liposomal suspensions with pH manipulated using nigericin could help to explain the question why there is a difference in values of pH measured in large cells by fluorescent probes as compared to those obtained directlywith microelectrodes. Moreover, with fluorescence lifetime measurements further improvement of the pH calibration protocol can be expected, as compared to the standard steady-state fluorescence techniques based on measurements of spectral shifts of exci
Keywords
Public support
Provider
Czech Science Foundation
Programme
Standard projects
Call for proposals
—
Main participants
Univerzita Karlova / Matematicko-fyzikální fakulta
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
—
Alternative language
Project name in Czech
Měření pH v modelových systémech liposomů pomocí fluorescenčních sond metodami stacionární a časově rozlišené fluorescence
Annotation in Czech
Cílem tohoto projektu je vyvinutí nových metod měření pH v suspenzích liposomů pomocí fluorescenčních sond a jejich využití při studiu činnosti protonové pumpy kvasinek zabudované v membráně liposomů. Aplikace stacionární a časově-rozlišené fluorescencepři studiu prázdných a proteinem plněných liposomů obarvených fluorescenční značkou by měla přispět k objasnění změn spektrálních a kinetických parametrů fluorescenčních sond při přechodu od roztoků pufrů k buňce. Studium suspenzí liposomů s pH nastavenýpomocí nigericinu by mohlo dát odpověď na otázku, proč se liší hodnoty pH velkých buněk změřené pomocí fluorescenčních sond od hodnot získaných přímým měřením využívajícím elektrod. Současně se dá očekávat zpřesnění kalibračních metod měřením změn dob života fluorescence použitých fluorescenčních sond, neboť v současnosti se při studiu živých buněk využívá téměř výhradně metod stacionární fluorescence založených na měření posuvů excsitačních nebo emisních spekter pH-citlivých barviv zavedených do cyto
Scientific branches
Completed project evaluation
Provider evaluation
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Project results evaluation
Byla vypracována metoda rutinního měření pH v liposomech v oblasti pH 6-8 pomocí fluorescenční sondy pyranin. Tato metoda umožňuje rovněž měření propustnosti membrány liposomů pro protony. Dále byla vypracována metoda přípravy proteoliposomů se zabudovan
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 1999
Realization period - end
Jan 1, 2001
Project status
U - Finished project
Latest support payment
—
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP/2002/GA0/GA02GA/U/N/7:3
Data delivery date
Apr 1, 2003
Finance
Total approved costs
2,262 thou. CZK
Public financial support
1,982 thou. CZK
Other public sources
760 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Basic information
Recognised costs
2 262 CZK thou.
Public support
1 982 CZK thou.
87%
Provider
Czech Science Foundation
CEP
BG - Nuclear, atomic and molecular physics, accelerators
Solution period
01. 01. 1999 - 01. 01. 2001