Characterization of novel host cell protein interacting with protease of Mason-Pfizer monkey virus
Project goals
The aim of this proposal is to characterize the interaction of Mason-Pfizer monkey virus protease (PR) with protein of unknown cellular function, which was identified by yeast two hybrid system and named PRotease Interacting Protein (PRIP). The interaction of both proteins in cells co-transfected with genes for both proteins will be confirmed by co-immunoprecipitation of PRIP with PR, by verification of their intracellular co-localization by confocal microscopy and pull-down assay. Direct proof of the interaction will be performed by titration of labeled PR with PRIP using NMR spectroscopy. PRIP will be characterized and its role in the cell will be studied by evaluation of changes of expression profiles induced by down-regulation of PRIP expression using siRNA. Microarrays and evaluation of biochemical and morphological characteristic will be performed. The project should shed some light on the function of PRIP in the cell and answer the question about the significance of its interaction with PR forvirus life cycle.
Keywords
Public support
Provider
Czech Science Foundation
Programme
Standard projects
Call for proposals
Standardní projekty 12 (SGA02009GA-ST)
Main participants
—
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
204-09-1388
Alternative language
Project name in Czech
Charakterizace nového buněčného proteinu interagujícího s proteasou Mason-Pfizerova opičího viru
Annotation in Czech
Předmětem grantové aplikace je charakterizace interakce proteasy (PR) Mason-Pfizerova opičího viru s buněčným proteinem, jehož vazba k PR byla identifikována pomocí dvojhybridního kvasinkového systému. Tento protein, jehož buněčná funkce není známa byl nazván PRIP (PRotease Interacting Protein). Vzájemná interakce v buňkách transfekovaných geny pro oba proteiny bude potvrzena koimunoprecipitací PRIP s PR, ověřením jejich kolokalizace v buňkách a ?pull-down? metodou. Studiem interakce delečních mutantů apeptidů budou charakterizovány oblasti obou proteinů zodpovědné za vzájemnou interakci. Pro přímý důkaz vzájemné interakce bude využita titrace značené PR pomocí PRIP sledovaná NMR spektroskopií. PRIP bude biochemicky charakterizován a jeho role v buňkách bude studována vyhodnocením změn vyvolaných potlačením jeho syntézy pomocí siRNA. Budou porovnány jak expresní profily normálních a umlčených buněk pomocí mikročipů, tak jejich biochemické a morfologické rysy. Výsledkem projektu by tedy měla být informace o roli PRIP v buňce a významu jeho interakce s PR pro životní cyklus viru.
Scientific branches
R&D category
ZV - Basic research
CEP classification - main branch
EB - Genetics and molecular biology
CEP - secondary branch
CE - Biochemistry
CEP - another secondary branch
EE - Microbiology, virology
10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10606 - Microbiology
10607 - Virology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
30101 - Human genetics
Completed project evaluation
Provider evaluation
V - Vynikající výsledky projektu (s mezinárodním významem atd.)
Project results evaluation
Project was successful. Important are structural characterizations of one domain of capsid protein of M-PMV by NMR spectroscopy and of immature retroviral capsid by electron microscopy. Results achieved during grant solution led to six papers in good journals (one in Nature) and one Czech patent employed by company Generi Biotech. Two papers are being reviewed.
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2009
Realization period - end
Dec 31, 2013
Project status
U - Finished project
Latest support payment
Jun 12, 2013
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP14-GA0-GA-U/01:1
Data delivery date
Jul 1, 2014
Finance
Total approved costs
3,130 thou. CZK
Public financial support
3,130 thou. CZK
Other public sources
0 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Recognised costs
3 130 CZK thou.
Public support
3 130 CZK thou.
0%
Provider
Czech Science Foundation
CEP
EB - Genetics and molecular biology
Solution period
01. 01. 2009 - 31. 12. 2013