New approaches to Chimeric Antigen Receptor T cells: analysis of RASAL3 protein function and identification of novel CAR-T activity-modifying genes
Project goals
Chimeric Antigen Receptor (CAR) T cells achieved remarkable success in treating B-cell malignancies, yet, their long term efficiency does not hold up to the original promises. Novel designs of CAR-T cells are urgently needed with further genetic editing for enhanced activity and persistence. We will elucidate the precise function of RASAL3, a negative regulator of T-cell signaling, and will assess its potential for augmenting CAR-T cell activity. We will generate RASAL3 knockout CAR-T cells to evaluate their signaling, activation strength and killing potential against malignant B cell lines in vitro and their activity, persistence and long-term effect in a mouse model. In addition, using a CRISPR/Cas9 knockout library, we will interrogate genes on a genome-wide level that are able to modulate and fully unleash the activity of CAR-T cells. Identified genes will be thoroughly validated and the underlying molecular mechanisms elucidated. They will be used to develop innovative designs of CAR-T cells, whose performance will be evaluated both in vitro and in vivo.
Keywords
CAR-T cellsRASAL3CRISPR/Cas9 screeningB-cell malignanciesT-cell signaling
Public support
Provider
Czech Science Foundation
Programme
Standard projects
Call for proposals
SGA0202200004
Main participants
Masarykova univerzita / Středoevropský technologický institut
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
22-35273S
Alternative language
Project name in Czech
Nové přístupy k T lymfocytům s Chimérickým Antigenním Receptorem: analýza proteinu RASAL3 a identifikace genů regulujících aktivitu CAR-T lymfocytů
Annotation in Czech
T lymfocyty s Chimérickým Antigenním Receptorem (CAR) dosáhly vynikajících úspěchů v léčbě B-buněčných malignit, ovšem jejich dlouhodobá účinnost zatím nedosahuje původních očekávání. Akutně jsou zapotřebí nové designy CAR-T lymfocytů s dalšími genetickými úpravami pro vyšší aktivitu a perzistenci. V tomto projektu prostudujeme detailní funkci proteinu RASAL3, negativního regulátoru T-buněčné signalizace, a ověříme jeho potenciál pro zvýšení aktivity CAR-T lymfocytů. Vytvoříme RASAL3 knockout CAR-T lymfocyty a prozkoumáme jejich signalizaci, aktivaci a míru eliminace maligních B-buněčných linií in vitro stejně jako jejich aktivitu, perzistenci a dobu účinnosti in vivo na myším modelu. Kromě toho využijeme CRISPR/Cas9 knockout knihovnu pro identifikaci genů na celogenomové úrovni, které jsou schopny modulovat a plně rozvinout aktivitu CAR-T lymfocytů. Identifikované geny budou důkladně validovány a jejich molekulární mechanismy prozkoumány. Validované geny využijeme k tvorbě inovativních designů CAR-T lymfocytů, jejichž účinnost prozkoumáme in vitro i in vivo.
Scientific branches
R&D category
ZV - Basic research
OECD FORD - main branch
30402 - Technologies involving the manipulation of cells, tissues, organs or the whole organism (assisted reproduction)
OECD FORD - secondary branch
30102 - Immunology
OECD FORD - another secondary branch
10601 - Cell biology
EA - Morphology and cytology
EC - Immunology
EI - Biotechnology and bionics
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2022
Realization period - end
Dec 31, 2024
Project status
—
Latest support payment
Feb 29, 2024
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP25-GA0-GA-R
Data delivery date
Mar 12, 2025
Finance
Total approved costs
8,916 thou. CZK
Public financial support
8,814 thou. CZK
Other public sources
102 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Recognised costs
8 916 CZK thou.
Public support
8 814 CZK thou.
0%
Provider
Czech Science Foundation
OECD FORD
Technologies involving the manipulation of cells, tissues, organs or the whole organism (assisted reproduction)
Solution period
01. 01. 2022 - 31. 12. 2024