Molecular mechanism of adenylate cyclase toxin penetration into phagocytes
Project goals
We propose to investigate the mechanistic details of adenylate cyclase toxin (CyaA) penetration across cellular membrane of myeloid phagocytes. Structural requirements for CyaA interaction with the beta-2 integrin receptor CD11b/CD18 and for translocation into cells will be investigated using a comprehensive set of complementary approaches. N-linked glycosylation sites on the receptor involved in CyaA binding will be identified and the CyaA-CD11b/CD18 complex visualized and characterized. Oligomerization of CyaA in phagocyte membrane and the kinetics and role in toxin uptake of CyaA-receptor complexes relocalization into lipid rafts will be assessed. Endocytic pathways taken and subverted by CyaA will be characterized and the mechanism and role of CyaA-induced vacuolization of phagocytes examined. The mechanism of programmed cell death induction by CyaA and its capacity to activate the inflammasome will be assessed to yield new fundamental knowledge on action of this intriguing toxin
Keywords
adenylate cyclase toxinCD11b/CD18protein trabslocation across membranecAMPBordetellainnate immunity
Public support
Provider
Academy of Sciences of the Czech Republic
Programme
Grants of distinctly investigative character focused on the sphere of research pursued at present particularly in the Academy of Sciences of the Czech Republic
Call for proposals
Výzkumné granty 9 (SAV02009-A)
Main participants
—
Contest type
VS - Public tender
Contract ID
IAA500200914
Alternative language
Project name in Czech
Molekulární mechanismus průniku adenylát-cyklázového toxinu do fagocytů
Annotation in Czech
V tomto projektu se zaměříme na objasnění molekulárních detailů průniku adenylát-cyklázového toxinu (CyaA) buněčnou membránou myeloidních fagocytů. Pomocí souboru komplementárních přistupů objasníme vztah mezi strukturou a funkcí CyaA při interakci s integrinovým receptorem CD11b/CD18 a průniku do buněk fagocytů. Identifikujeme glykosylační místa receptoru nezbytná pro vazbu CyaA a visualizujeme a určíme kinetiku vzniku a stechiometrii oligomerních komplexů CyaA v membráně fagocytů. Pozornost budeme věnovat analýze a objasnění významu mobilizace CyaA do lipidických mikrodomén buněčné membrány a charakterizaci procesu endocytosy CyaA. Prostudujeme také mechanismus a význam vakuolizace buněk vyvolané působením CyaA na molekulární úrovni. Konečně, charakterizujeme mechanismus jímž CyaA indukuje apoptózu fagocytů a prověříme zda přitom aktivuje vznik inflamosomu. Tento projekt tak přinese nové základní poznatky o molekulárním mechanismu průniku CyaA do buněk a jeho působení na fagocyty.
Scientific branches
R&D category
ZV - Basic research
CEP classification - main branch
EB - Genetics and molecular biology
CEP - secondary branch
CE - Biochemistry
CEP - another secondary branch
EC - Immunology
10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
30101 - Human genetics
30102 - Immunology
Completed project evaluation
Provider evaluation
V - Vynikající výsledky projektu (s mezinárodním významem atd.)
Project results evaluation
The interaction of adenylate cyclase toxin with complement receptor 3, the membrane interaction and translocation, lipid raft relocation, pore-forming activity and escape from endocytosis of the toxin were deciphered in mechanistic detail.
Solution timeline
Realization period - beginning
Jan 1, 2009
Realization period - end
Dec 31, 2013
Project status
U - Finished project
Latest support payment
Feb 27, 2013
Data delivery to CEP
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data delivery code
CEP14-AV0-IA-U/01:1
Data delivery date
Apr 14, 2014
Finance
Total approved costs
7,666 thou. CZK
Public financial support
7,666 thou. CZK
Other public sources
0 thou. CZK
Non public and foreign sources
0 thou. CZK
Basic information
Recognised costs
7 666 CZK thou.
Public support
7 666 CZK thou.
100%
Provider
Academy of Sciences of the Czech Republic
CEP
EB - Genetics and molecular biology
Solution period
01. 01. 2009 - 31. 12. 2013