The use of bacteriophages for the rapid detection of viable causative agent of paratuberculosis by the Phage assay

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F18%3AN0000241" target="_blank" >RIV/00027162:_____/18:N0000241 - isvavai.cz</a>

Result on the web

<a href="http://www.med.muni.cz/tomdny/Sbornik-TD-2018-RV2.pdf" target="_blank" >http://www.med.muni.cz/tomdny/Sbornik-TD-2018-RV2.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Využití bakteriofágů pro rychlou detekci životaschopného původce paratuberkulózy metodou phage assay

Original language description

XXVII. Tomáškovy dny mladých mikrobiologů. Paratuberkulóza je celosvětově rozšířeným chronickým střevním onemocněním domácích i volně žijících přežvýkavců, které má za následek významné finanční ztráty projevující se v mlékárenském a masném průmyslu. Původcem onemocnění je pomalu rostoucí a ve vnějším prostředí vysoce odolná bakterie Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Typické příznaky onemocnění, jakými jsou chronické hubnutí a chřadnutí, snížená dojivost a průjmy, se mohou dostavit i dva až čtyři roky po infekci, nicméně MAP je masivně vylučována v trusu do prostředí klinicky i subklinicky nemocnými zvířaty. Ty se následně stávají zdrojem infekce pro další zdravé jedince ve stádě. Nedostatek rychlých a specifických detekčních testů k průkazu životaschopných buněk MAP ztěžuje včasnou diagnostiku, která je pro zamezení šíření a eliminaci paratuberkulózy ve stádě nezbytná. Za definitivní diagnostický test pro MAP je v současnosti považována kultivace, nicméně tato metoda je časově velmi náročná a v důsledku nutnosti aplikace chemické dekontaminace k potlačení růstu kompetitivních organismů i méně citlivá. V poslední době hojně využívané metody založené na polymerázové řetězové reakci (PCR) jsou sice více specifické a rychlejší, nedovedou však rozlišit mezi přítomností živých nebo neživých mykobakterií ve vzorku, což může představovat problém při interpretaci výsledků. Phage assay je novým přístupem k diagnostice původce paratuberkulózy. Metoda umožňuje detekci a kvantifikaci životaschopných buněk MAP v různých typech matric včetně mléka, sýru, krve a trusu během 48 hodin. Je založena na schopnosti bakteriofága D29 replikovat se pouze uvnitř živé buňky MAP a následně tuto buňku lyzovat. Počáteční koncentrace buněk ve vzorku je odvozena z počtu plaků vytvořených v důsledku lyze buněk MAP napadených fágem v nárůstu rychle rostoucí bakterie Mycobacterium smegmatis na agarové plotně. Udávaná citlivost metody je jedna až deset živých buněk MAP v jednom mililitru vzorku. V rámci výzkumu bylo metodami konvenční kultivace, real time PCR a phage assay otestováno na přítomnost MAP 20 vzorků lymfatické tkáně a tenkého střeva skotu. Metoda phage assay představuje vhodnou alternativu ke konvenčním kultivačním technikám.

Czech name

Využití bakteriofágů pro rychlou detekci životaschopného původce paratuberkulózy metodou phage assay

Czech description

XXVII. Tomáškovy dny mladých mikrobiologů. Paratuberkulóza je celosvětově rozšířeným chronickým střevním onemocněním domácích i volně žijících přežvýkavců, které má za následek významné finanční ztráty projevující se v mlékárenském a masném průmyslu. Původcem onemocnění je pomalu rostoucí a ve vnějším prostředí vysoce odolná bakterie Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Typické příznaky onemocnění, jakými jsou chronické hubnutí a chřadnutí, snížená dojivost a průjmy, se mohou dostavit i dva až čtyři roky po infekci, nicméně MAP je masivně vylučována v trusu do prostředí klinicky i subklinicky nemocnými zvířaty. Ty se následně stávají zdrojem infekce pro další zdravé jedince ve stádě. Nedostatek rychlých a specifických detekčních testů k průkazu životaschopných buněk MAP ztěžuje včasnou diagnostiku, která je pro zamezení šíření a eliminaci paratuberkulózy ve stádě nezbytná. Za definitivní diagnostický test pro MAP je v současnosti považována kultivace, nicméně tato metoda je časově velmi náročná a v důsledku nutnosti aplikace chemické dekontaminace k potlačení růstu kompetitivních organismů i méně citlivá. V poslední době hojně využívané metody založené na polymerázové řetězové reakci (PCR) jsou sice více specifické a rychlejší, nedovedou však rozlišit mezi přítomností živých nebo neživých mykobakterií ve vzorku, což může představovat problém při interpretaci výsledků. Phage assay je novým přístupem k diagnostice původce paratuberkulózy. Metoda umožňuje detekci a kvantifikaci životaschopných buněk MAP v různých typech matric včetně mléka, sýru, krve a trusu během 48 hodin. Je založena na schopnosti bakteriofága D29 replikovat se pouze uvnitř živé buňky MAP a následně tuto buňku lyzovat. Počáteční koncentrace buněk ve vzorku je odvozena z počtu plaků vytvořených v důsledku lyze buněk MAP napadených fágem v nárůstu rychle rostoucí bakterie Mycobacterium smegmatis na agarové plotně. Udávaná citlivost metody je jedna až deset živých buněk MAP v jednom mililitru vzorku. V rámci výzkumu bylo metodami konvenční kultivace, real time PCR a phage assay otestováno na přítomnost MAP 20 vzorků lymfatické tkáně a tenkého střeva skotu. Metoda phage assay představuje vhodnou alternativu ke konvenčním kultivačním technikám.

Type

O - Miscellaneous

CEP classification

—

OECD FORD branch

10606 - Microbiology

Project

<a href="/en/project/LO1218" target="_blank" >LO1218: Healthy animal as a source of wholesome food</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2018

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů