Study of Fluorescently Labelled Peptides and Small Proteins Using Capillary Electrophoresis Combined with Laser Induced Fluorescence and MALDI MS Detection

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216224%3A14310%2F05%3A00012704" target="_blank" >RIV/00216224:14310/05:00012704 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Study of Fluorescently Labelled Peptides and Small Proteins Using Capillary Electrophoresis Combined with Laser Induced Fluorescence and MALDI MS Detection

Original language description

In this work, we apply CE-LIF, CE-UV and CE - Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI TOFMS) to investigate derivatization of model peptides and small proteins with rhodamine-based fluorescent reagents, which are compatible with the wavelength of frequency doubled diode pumped Nd:YAG excitation laser (532 nm). While the LIF detection mode is needed for sensitive detection, the MALDI TOFMS analysis can reveal the mass of analytes. Both derivatized and non-derivatized peptides and proteins, the number of fluorescent labels per peptide/proteins and other product of derivatization process can be detected directly from reaction mixtures or after separation. Thus, MALDI TOFMS serves for additional identification ofpeaks present in CELIF or CEUV electropherograms. For off-line coupling of CE with MALDI MS, subatmospheric deposition interface was used. An examples of final sensitive CELIF separation of derivatized peptides and small proteins are giv

Czech name

Studium fluorescenčně značených peptidů a malých proteinů pomocí kapilární elektroforézy s laserem indukovanou detekcí kombinovanou s hmotnostní spektrometrií MALDI.

Czech description

V této práci aplikujeme metody CELIF, CEUV a CE-MALDITOF MS pro analýzu modelových peptidů a proteinů derivatizovaných fluorescenčními barvivy založenými na rhodaminu. Fluorescence připravených rhodaminových derivátů je excitovatelná snadno dostupným pevnolátkovým laserem - diodově pumpovaným Nd:YAG s dvojitě násobenou frekvencí a vlnovou délkou 532 nm. Laserem indukovaná fluorescenční detekce umožňuje velmi citlivé stanovení látek. Podmínkou aplikovatelnosti metody je však dobrá optimalizace celého postupu derivatizace a spolehlivá identifikace elektroferogramu z metody CELIF nebo CEUV. K tomuto účelu je využito laboatorně sestavená konstrukce pro kombinaci CE s hmotnostně spektrometrickou detekcí MALDITOF. V práci jsou na separacích derivatizovanýchsměsí peptidů a malých proteinů demonstrovány možnosti derivatizace pro 532 nm LIF detektor, a je diskutována citlivost stanovení reálných analytů včetně porovnání s metodou CE bez použití derivatizace a LIF detekce.

Type

D - Article in proceedings

CEP classification

CB - Analytical chemistry, separation

OECD FORD branch

—

Project

<a href="/en/project/GA203%2F03%2F0515" target="_blank" >GA203/03/0515: Integrated genome and proteome analysis of therapeutically important bacteriophages by combination of electrophoresis and mass spectrometry</a><br>

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2005

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Article name in the collection

Collection Symposium Series, Biollogicaly Active Peptides

ISBN

80-86241-26-2

ISSN

—

e-ISSN

—

Number of pages

4

Pages from-to

103-106

Publisher name

Institute of Organic Chemistry and Biochemistry, Academy of Sciences of the Czech Republic

Place of publication

Praha

Event location

Praha, ÚOCHB AVČR

Event date

Apr 20, 2005

Type of event by nationality

EUR - Evropská akce

UT code for WoS article

—