Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216275%3A25310%2F05%3A00002829" target="_blank" >RIV/00216275:25310/05:00002829 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection

Original language description

A method for measurement of both reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in plasma, erythrocytes and hepatocytes has been developed and evaluated. Reduced glutathione reacts with orthophthaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8, while GSSG reacts with OPA at pH 12. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, reverse phase column Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um, was used. The mixture of methanol and 25 mmol/l phosphate buffer (15:85, v/v), pH 6.00, was used as mobile phase. Excellent linearity was achieved. The intra- and inter-assay coefficient of variation was 3.8% and 5.2%, respectively. The recovery was 95-105%, and limit of detection was 0.1 pmol of glutathione adduct. We have developed highly selective, sensitivite and rapid method for measurement of both GSH and GSSG in biological samples.

Czech name

Stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu pomocí kapalinové chromatografie s fluorimetrickou detekcí

Czech description

Vyvinuli jsme metodu pro stanovení redukovaného i oxidovaného glutathionu v plazmě, erytrocytech a hepatocytech. Redukovaný glutathion (GSH) reaguje při pH 8 s orthoftalaldehydem (OPA) za vzniku stabilního a vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu,zatímco oxidovaný gltathion (GSSG) reaguje s OPA při pH 12. Při stanovení GSSG byl GSH maskován N-ethylmaleimidem. Pro separaci jsme jako stacionární fázi použili chromatografickou kolonu Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um. Jako mobilní fáze byla použita směs methanolu a 25 mmol/l fosfátového pufru (15:85, v/v), pH 6,00. Bylo dosaženo znamenité výtěžnosti. Variační koeficient pro přesnost v sérii byl 3,8% a pro přesnost mezi sériemi 5,2%. Výtěžnost metody byla mezi 95 a 105% a mez detekce byl 0,1 pmol derivátu. Vyvinuli jsme vysoce selektivní, citlivou a rychlou metodu pro stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu v biologických vzorcích.

Type

D - Article in proceedings

CEP classification

CB - Analytical chemistry, separation

OECD FORD branch

—

Project

—

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2005

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Article name in the collection

Clin. Chim. Acta suppl.

ISBN

0009-8981

ISSN

—

e-ISSN

—

Number of pages

1

Pages from-to

220

Publisher name

Elsevier

Place of publication

UK

Event location

Glasgow, Skotsko

Event date

May 8, 2005

Type of event by nationality

WRD - Celosvětová akce

UT code for WoS article

—