Enzyme and Lectin Magnetic Reactors for Analysis of Glycoproteins by Signature Peptide Approach

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216275%3A25310%2F05%3A00003013" target="_blank" >RIV/00216275:25310/05:00003013 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Enzyme and Lectin Magnetic Reactors for Analysis of Glycoproteins by Signature Peptide Approach

Original language description

For qualitative identification and characterization of proteins with high heterogeneity in post-translational modification and amino acid composition the signature peptides approach is preferable to peptide mapping technique. In order to develop improvedmethod for determination of agalactosylated form of model glycoprotein immunoglobulin G which is closely associated with autoimmune diseases, we decided to combine the high specificity of enzyme and lectin magnetic reactors with sensitivity of MS analysis. Due to the high variability of amino-acid compositions and the present of additional four potential glycosylation sites in the hypervariable regions of Fab fragment, IgG molecules had to be splitted using papain reactor and obtained Fc fragments wereafter purified by affinity chromatography. The signature peptides of IgG are derived from Fc-fragments with conserved N-glycosylation site at the position Asn297.Highly active enzyme reactors with immobilized TPCK-trypsin, neuraminidase,

Czech name

Enzymové a lektinové magnetické reaktory pro analýzu glykoproteinů

Czech description

Peptidové mapování s použitím tzv. "signature" peptidů se preferenčně používá pro identifikaci a charakterizaci proteinů s vysokou heterogenitou post-translačních modifikací a aminokyselinového složení.Pro vývoj metody k detekci agalaktosylované formy modelového glykoproteinu IgG, která je úzce spjatá s autoimunitními onemocněními, jsme se rozhodli kombinovat specifitu enzymových a lektinových magnetických reaktorů s vysokou citlivostí MS analýzy. "Specifický" peptid IgG je nanopeptid odvozený z Fc fragmentu s konzervovanou N-glykosylací v pozici Asn 297. Vzhledem k velké heterogenitě aminokyselinové sekvence a přítomnosti dalších čtyř potenciálních glykozylačních míst v hypervariabilních oblastech Fab fragmentu, bylo nutné Fc fragmenty po roštěpení IgG molekuly pomocí papainového reaktoru na směs Fc a Fab fragmentů purifikovat afinitní chromatografií s proteinem A. Vysoce aktivní enzymové reaktory s imobilizovaným TPCK-trypsinem, neuraminidázou, beta-D-galaktosidázou a lektinové r

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

CB - Analytical chemistry, separation

OECD FORD branch

—

Project

<a href="/en/project/GA203%2F02%2F0023" target="_blank" >GA203/02/0023: Development of new procedures for highly reliable analytical control of technologies,materials,food &environment & for med. diagnostic using modern instrumentat</a><br>

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2005

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Scientific Papers of the University of Pardubice, Series A

ISSN

1211-5541

e-ISSN

—

Volume of the periodical

11

Issue of the periodical within the volume

neuveden

Country of publishing house

CZ - CZECH REPUBLIC

Number of pages

17

Pages from-to

15-31

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—