Use of DNA repair enzymes in electrochemical detection of damage to DNA bases in vitro and in cells

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F68081707%3A_____%2F05%3A00001206" target="_blank" >RIV/68081707:_____/05:00001206 - isvavai.cz</a>

Alternative codes found

RIV/68081707:_____/05:00373435

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Use of DNA repair enzymes in electrochemical detection of damage to DNA bases in vitro and in cells

Original language description

In this paper, we propose a new voltammetric method for the detection of the DNA base damage based on enzymatic conversion of the damaged DNA bases to single-strand breaks (ssb), single-stranded (ss) DNA regions, or both. Supercoiled DNA exposed to UV light was specifically cleaved by T4 endonuclease V, an enzyme recognizing pyrimidine dimers, the major products of photochemical DNA damage. Apurinic sites (formed in dimethyl sulfate - modified DNA) were determined after treating the DNA with E. coli exonuclease III, an enzyme introducing ssb at the abasic sites and degrading one of the DNA strands. The ssb or ssDNA regions, or both, were detected by adsorptive transfer stripping alternating current voltammetry at the mercury electrode. This technique offers much better sensitivity and selectivity of DNA base damage detection than any other electrochemical method and it can detect also DNA base damage induced in living bacterial cells.

Czech name

Využití DNA reparačních enzymů v elektrochemické detekci poškození bází in vitro a uvnitř buněk

Czech description

V této práci navrhujeme novou voltametrickou metodu pro detekci poškození bází v DNA, založenou na enzymatické konverzi poškozených bází na jednořetězcové (ssb) zlomy a/nebo jednořetězcové (ss) úseky. Nadšroubovicová plasmidová DNA vystavená UV záření byla specificky štípána T4 endonukleázou V, enzymem rozpoznávajícím pyrimidinové dimery - hlavní produkty fotochemického poškození DNA. Apurinová místa, vytvořená v DNA modifikované dimethyl sulfátem, byla rozpoznána enzymem exonukleáza III, který do abazického místa zavádí zlomy a postupně degraduje řetězec DNA. Ssb a/nebo ss úseky byly detekovány adsorptivní přenosovou rozpouštěcí voltametrií na rtuňové elektrodě. Tato metoda poskytuje lepší citlivost a selektivitu při měření, než jiné dosud popsané elektrochemické metody a může být využita i k detekci poškození bází vyvolaných v živých bakteriálních buňkách.

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

BO - Biophysics

OECD FORD branch

—

Project

Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.

Continuities

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2005

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Analytical Chemistry

ISSN

0003-2700

e-ISSN

—

Volume of the periodical

77

Issue of the periodical within the volume

9

Country of publishing house

US - UNITED STATES

Number of pages

8

Pages from-to

2920-2927

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—