Application of PLA method for detection of p53/p63/p73 complexex in situ in tumour cells and tumour tissue
The result's identifiers
Result code in IS VaVaI
<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00209805%3A_____%2F17%3A00077799" target="_blank" >RIV/00209805:_____/17:00077799 - isvavai.cz</a>
Result on the web
<a href="https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/213.pdf" target="_blank" >https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/213.pdf</a>
DOI - Digital Object Identifier
—
Alternative languages
Result language
čeština
Original language name
Využití metody PLA pro detekci komplexů p53/p63/p73 in situ v nádorových buňkách a nádorové tkáni
Original language description
Východiska: PLA (proximity ligation assay) je metoda umožňující detekovat protein-proteinové interakce in situ přímo v buňce nebo tkáni. Její hlavní výhodou je vysoká citlivost a specifi - cita umožňující detekovat, lokalizovat a kvantifi kovat proteinové komplexy s vysokým rozlišením až jednotlivých molekul. Jedním z mechanizmů "gain of function" mutovaného p53 je tvorba komplexů s dalšími členy proteinové rodiny p53 - p63 a p73. Tyto interakce pak mají přímý vliv na chemosenzitivitu nádorových buněk a jejich invazivní potenciál, a proto jsou komplexy p53/ p63/ p73 nadějným cílem protinádorové terapie. Cílem této práce je prokázat existenci komplexů p53/ p63/ p73 in situ v nádorových buňkách a v nádorové tkáni na parafi - nových řezech s využitím metody PLA. Materiál a metody: Pro detekci izoforem p63 a p73 byly na našem pracovišti charakterizovány unikátní specifi cké protilátky. Proteinové komplexy byly detekovány metodou PLA ve stabilních buněčných liniích SVK14, HCC1806 a FaDu a na parafi nových řezech z tkáně kolorektálního karcinomu. Buněčné linie byly zpracovány do parafi nových bloků, aby je bylo možné využít jako model pro optimalizaci protokolu pro barvení tkáňových řezů. Výsledky: V buňkách SVK14 exprimujících virový T antigen jsme metodou PLA detekovali komplex p53/T antigen a ΔNp63/T antigen. Interakci izoforem ΔNp63 a TAp73 jsme zaznamenali v linii HCC1806 s endogenní expresí těchto proteinů. V linii FaDu byl lokalizován komplex mut-p53/ TAp73, ne však mut-p53/ ΔNp63. Přímo v nádorové tkáni kolorektálního karcinomu se podařilo detekovat tetramer mutovaného p53. Závěr: V rámci vývoje metody PLA pro detekci komplexů proteinů z rodiny p53 jsme v nádorových buněčných liniích detekovali komplexy p53 a p63 s T antigenem, komplexy mutovaného p53 a ΔNp63 s nádorovým supresorem TAp73 a na parafi nových řezech kolorektálního karcinomu tetramery p53. Další vývoj metody bude směřovat k detekci komplexů p53/ p63, p53/ p73 a p63/ p73 v nádorové tkáni a testování možnosti využití PLA pro screening látek blokujících tvorbu těchto komplexů.
Czech name
Využití metody PLA pro detekci komplexů p53/p63/p73 in situ v nádorových buňkách a nádorové tkáni
Czech description
Východiska: PLA (proximity ligation assay) je metoda umožňující detekovat protein-proteinové interakce in situ přímo v buňce nebo tkáni. Její hlavní výhodou je vysoká citlivost a specifi - cita umožňující detekovat, lokalizovat a kvantifi kovat proteinové komplexy s vysokým rozlišením až jednotlivých molekul. Jedním z mechanizmů "gain of function" mutovaného p53 je tvorba komplexů s dalšími členy proteinové rodiny p53 - p63 a p73. Tyto interakce pak mají přímý vliv na chemosenzitivitu nádorových buněk a jejich invazivní potenciál, a proto jsou komplexy p53/ p63/ p73 nadějným cílem protinádorové terapie. Cílem této práce je prokázat existenci komplexů p53/ p63/ p73 in situ v nádorových buňkách a v nádorové tkáni na parafi - nových řezech s využitím metody PLA. Materiál a metody: Pro detekci izoforem p63 a p73 byly na našem pracovišti charakterizovány unikátní specifi cké protilátky. Proteinové komplexy byly detekovány metodou PLA ve stabilních buněčných liniích SVK14, HCC1806 a FaDu a na parafi nových řezech z tkáně kolorektálního karcinomu. Buněčné linie byly zpracovány do parafi nových bloků, aby je bylo možné využít jako model pro optimalizaci protokolu pro barvení tkáňových řezů. Výsledky: V buňkách SVK14 exprimujících virový T antigen jsme metodou PLA detekovali komplex p53/T antigen a ΔNp63/T antigen. Interakci izoforem ΔNp63 a TAp73 jsme zaznamenali v linii HCC1806 s endogenní expresí těchto proteinů. V linii FaDu byl lokalizován komplex mut-p53/ TAp73, ne však mut-p53/ ΔNp63. Přímo v nádorové tkáni kolorektálního karcinomu se podařilo detekovat tetramer mutovaného p53. Závěr: V rámci vývoje metody PLA pro detekci komplexů proteinů z rodiny p53 jsme v nádorových buněčných liniích detekovali komplexy p53 a p63 s T antigenem, komplexy mutovaného p53 a ΔNp63 s nádorovým supresorem TAp73 a na parafi nových řezech kolorektálního karcinomu tetramery p53. Další vývoj metody bude směřovat k detekci komplexů p53/ p63, p53/ p73 a p63/ p73 v nádorové tkáni a testování možnosti využití PLA pro screening látek blokujících tvorbu těchto komplexů.
Classification
Type
D - Article in proceedings
CEP classification
—
OECD FORD branch
30204 - Oncology
Result continuities
Project
<a href="/en/project/LO1413" target="_blank" >LO1413: RECAMO2020</a><br>
Continuities
P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)
Others
Publication year
2017
Confidentiality
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Data specific for result type
Article name in the collection
Klinická onkologie
ISBN
—
ISSN
0862-495X
e-ISSN
1802-5307
Number of pages
3
Pages from-to
"S159"-"S162"
Publisher name
Česká lékařská společnost J.E. Purkyně
Place of publication
Praha
Event location
Brno
Event date
Apr 26, 2017
Type of event by nationality
CST - Celostátní akce
UT code for WoS article
—