Downregulation of the nuclear-encoded subunits of the complexes III and IV disrupts their respective complexes but not complex I in procyclic Trypanosoma brucei

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60077409%3A_____%2F05%3A00023757" target="_blank" >RIV/60077409:_____/05:00023757 - isvavai.cz</a>

Alternative codes found

RIV/60076658:12310/05:00006342

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Downregulation of the nuclear-encoded subunits of the complexes III and IV disrupts their respective complexes but not complex I in procyclic Trypanosoma brucei

Original language description

The function, stability and mutual interactions of selected nuclear-encoded subunits of respiratory complexes III and IV were studied in the Trypanosoma brucei procyclics using RNA interference (RNAi). Western analysis of mitochondrial lysates using specific antibodies confirmed complete elimination of the targeted proteins 4 to 6 days post-induction. As revealed by two-dimensional blue native/SDS PAGE electrophoresis, silencing of a single subunit resulted in the disruption of the respective complex, while the other complex remained unaffected. Membrane potential was reproducibly decreased in the knock-downs and the activities of complex III and/or IV, but not complex I, were drastically reduced, as measured by activity assays and histochemical staining. The apparent absence in T. brucei procyclics of a supercomplex composed of complexes I and III may represent an ancestral state of the respiratory chain.

Czech name

Eliminace jaderně kódovaných podjednotek komplexů III a IV způsobuje rozpad těchto komplexů ale ne komplexu I u Trypanosoma brucei

Czech description

Metodou interference RNA (RNAi) jsme studovali funkci, stabilitu a vzájemné interakce vybraných jaderně-kodovaných podjednotek respiračních komplexů III a IV z procyklických stádií Trypanosoma brucei. Pomocí westernové analýzy byla v mitochondriálních lyzátech 4-6 dní po indukci RNAi prokázána úplná eliminace cílových proteinů. Naopak, jiná podjednotka komplexu IV zůstala při eliminaci cox6 neovlivněna. Jak bylo ukázáno prostřednictvím dvourozměrné nativní elektroforézy, způsobilo vypnutí jedné podjednotky rozpad celého příslušného komplexu, zatímco ostatní komplexy zůstaly intaktní. Ve všech knock-downech rovněž poklesl membránový potenciál a drasticky poklesly aktivity komplexů III a IV, ale ne komplexu I. Za pomoci specifických inhibitorů jsme ukázali, že procyklická stádia s poškozenými respiračními komplexy častečně přesměrují tok elektronů na alternativní oxidázu. Rovněž byla prokázána absence superkomplexu z komplexů I a III u T. brucei.

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

EB - Genetics and molecular biology

OECD FORD branch

—

Project

<a href="/en/project/IAA5022302" target="_blank" >IAA5022302: Functional analysis of candidate components of the RNA editing machinery in the flagellate Trypanosoma brucei</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2005

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Molecular Microbiology

ISSN

0950-382X

e-ISSN

—

Volume of the periodical

58

Issue of the periodical within the volume

1

Country of publishing house

GB - UNITED KINGDOM

Number of pages

15

Pages from-to

116-130

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—