Finding the optimal diluent for freezing stallion epididymal sperm

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F62157124%3A16170%2F21%3A43879271" target="_blank" >RIV/62157124:16170/21:43879271 - isvavai.cz</a>

Result on the web

<a href="https://www.vfu.cz/files/upload/693/Sbornik_IGA_2021.pdf" target="_blank" >https://www.vfu.cz/files/upload/693/Sbornik_IGA_2021.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Vyhledání optimálního ředidla pro mrazení epididymálních spermií hřebců

Original language description

Kryokonzervace epididymálních spermií je metoda, která umožňuje záchranu genetického materiálu cenných zvířat při krizových situacích, a protože se jedná právě o finální kolekci spermií, je důležité používat optimální protokol pro jejich zpracování a mrazení. Úspěch kryokonzervace hřebčích epididymálních spermií závisí na teplotě skladování biologického materiálu, rychlosti ochlazování, hygienické kontrole a chemickém složení ředidla. Hlavním cílem projektu bylo ověřit teorii, že motilita epididymálních spermií po rozmrazení je rozdílná v závislosti na použitém ředidle a vyhledat optimální kryokonzervační ředidlo, v závislosti na posouzení dat z měření parametrů celkové a progresivní motility po rozmrazení pomocí CASA systému. Autoři vycházeli z dat předchozí studie podporované interní grantovou agenturou IGA 115/2020/FVL, ze které vyplynula ideální koncentrace spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, s přídavkem glycerolu 4%, ale ani u této nejlepší kombinace nebyla motilita spermií po rozmrazení uspokojivá. Spermie byly mrazeny pouze v jednom typu ředidla (Gent) a bylo by tedy vhodné pokusit se najít vhodnější ředidlo právě pro mrazení epididymálních spermií. V projektu byly použity epididymální spermie získané retrográdním výplachem ocasu nadvarlete a ductus deferens z nadvarlat hřebců kastrovaných na KCHK i v terénních podmínkách. Po výplachu byla orientačně posouzena jejich motilita pomocí světelného mikroskopu a pomocí CASA systému. Vzorky byly následně zcentrifugovány, supernatant odsát a spermie resuspendovány v 4 běžně dostupných a nejčastěji používaných ředidlech pro koňské spermie (INRA 96, Gent, francouzské ředidlo a BotuSemen GOLD), s koncentrací spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, které jsme doplnili na námi zjištěnou nejlepší koncentraci glycerolu 4 %. Jejich motilita byla posouzena pomocí CASA systému. Vzorky byly rozplněny do pejet a zamrazeny běžným postupem KCHK. Nejdříve po 5 dnech byly rozmrazeny a pomocí CASA systému byla posuzována motilita ihned po rozmrazení, a inkubaci ve vodní lázni po 60, 120 a 180 min. Nejlepší motility vykazovaly vzorky naředěné ředidlem INRA 96, u těchto vzorků byla i po 180 min inkubace zaznamenána téměř 30% motilita, což je motilita dostatečná k praktickému využití.

Czech name

Vyhledání optimálního ředidla pro mrazení epididymálních spermií hřebců

Czech description

Kryokonzervace epididymálních spermií je metoda, která umožňuje záchranu genetického materiálu cenných zvířat při krizových situacích, a protože se jedná právě o finální kolekci spermií, je důležité používat optimální protokol pro jejich zpracování a mrazení. Úspěch kryokonzervace hřebčích epididymálních spermií závisí na teplotě skladování biologického materiálu, rychlosti ochlazování, hygienické kontrole a chemickém složení ředidla. Hlavním cílem projektu bylo ověřit teorii, že motilita epididymálních spermií po rozmrazení je rozdílná v závislosti na použitém ředidle a vyhledat optimální kryokonzervační ředidlo, v závislosti na posouzení dat z měření parametrů celkové a progresivní motility po rozmrazení pomocí CASA systému. Autoři vycházeli z dat předchozí studie podporované interní grantovou agenturou IGA 115/2020/FVL, ze které vyplynula ideální koncentrace spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, s přídavkem glycerolu 4%, ale ani u této nejlepší kombinace nebyla motilita spermií po rozmrazení uspokojivá. Spermie byly mrazeny pouze v jednom typu ředidla (Gent) a bylo by tedy vhodné pokusit se najít vhodnější ředidlo právě pro mrazení epididymálních spermií. V projektu byly použity epididymální spermie získané retrográdním výplachem ocasu nadvarlete a ductus deferens z nadvarlat hřebců kastrovaných na KCHK i v terénních podmínkách. Po výplachu byla orientačně posouzena jejich motilita pomocí světelného mikroskopu a pomocí CASA systému. Vzorky byly následně zcentrifugovány, supernatant odsát a spermie resuspendovány v 4 běžně dostupných a nejčastěji používaných ředidlech pro koňské spermie (INRA 96, Gent, francouzské ředidlo a BotuSemen GOLD), s koncentrací spermií 1000 x 10ˇ6 v ml, které jsme doplnili na námi zjištěnou nejlepší koncentraci glycerolu 4 %. Jejich motilita byla posouzena pomocí CASA systému. Vzorky byly rozplněny do pejet a zamrazeny běžným postupem KCHK. Nejdříve po 5 dnech byly rozmrazeny a pomocí CASA systému byla posuzována motilita ihned po rozmrazení, a inkubaci ve vodní lázni po 60, 120 a 180 min. Nejlepší motility vykazovaly vzorky naředěné ředidlem INRA 96, u těchto vzorků byla i po 180 min inkubace zaznamenána téměř 30% motilita, což je motilita dostatečná k praktickému využití.

Type

D - Article in proceedings

CEP classification

—

OECD FORD branch

40301 - Veterinary science

Project

—

Continuities

S - Specificky vyzkum na vysokych skolach<br>I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Publication year

2021

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Article name in the collection

Sborník příspěvků z výsledků řešení projektů IGA VETUNI 2021

ISBN

978-80-7305-865-4

ISSN

—

e-ISSN

—

Number of pages

4

Pages from-to

60-63

Publisher name

Veterinární univerzita Brno

Place of publication

Brno

Event location

Brno

Event date

Dec 14, 2021

Type of event by nationality

EUR - Evropská akce

UT code for WoS article

—