Electrochemical detection of DNA triplet repeat expansion

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F68081707%3A_____%2F04%3A00108406" target="_blank" >RIV/68081707:_____/04:00108406 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Electrochemical detection of DNA triplet repeat expansion

Original language description

Hereditary neurodegenerative diseases are connected with the expansion of trinucleotide repetitive sequences in genomic DNA. Molecular diagnosis of these diseases is based on the determination of the triplet repeat length. Currently used methods involvePCR amplification followed by electrophoretic determination of the amplicon size. We propose a novel electrochemical technique based on hybridization of target DNA (tDNA) immobilized at magnetic beads with a reporter probe (RP) complementary to the triplet repeats (12 units per RP). The biotin-labeled RP is detected via an enzyme-linked electrochemical assay involving binding of streptavidin-alkaline phosphatase conjugate and transformation of electroinactive 1-naphthyl phosphate to electroactive 1-naphthol. Pyrimidine residues within sequences flanking the homopurine (GAA)n repeat in tDNA are premodified with osmium tetroxide, 2,2'-bipyridine (Os,bipy), introducing electroactive labels in tDNA.

Czech name

Elektrochemická detekce expanze trinukleotidových opakování v DNA

Czech description

Vrozené neurodegenerativní choroby jsou spojeny s prodlužováním repetitivních sekvencí v genomové DNA. Molekulární diagnostika těchto chorob je založena na stanovení délky trinukleotidového opakování. V současnosti užívané metody zahrnují amplifikaci pomocí PCR s následným elektroforetickým stanovením délky vzniklého PCR produktu. Navrhujeme novou elektrochemickou techniku založenou na hybridizaci cílové DNA (tDNA) zakotvené na magnetických kuličkách s reportérovou sondou (RP) komplementární k sekvencitrinukleotidových opakování (12 jednotek na RP). Biotinem značená RP je stanovena pomocí imunoenzymové reakce s elektrochemickou detekcí zahrnující vazbu konjugátu streptavidinu s alkalickou fosfatázou a přeměnu elektroinaktivního 1-naftylfosfátu na elektroaktivní 1-naftol. Pyrimidinové baze v sekvencích sousedících s homopurinovým (GAA)n opakováním v tDNA jsou předmodifikovány komplexem oxidu osmičelého s 2,2'-bipyridinem (Os, bipy), který do tDNA zavádí elektroaktivní značku.

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

BO - Biophysics

OECD FORD branch

—

Project

Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Publication year

2004

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Journal of the American Chemical Society

ISSN

0002-7863

e-ISSN

—

Volume of the periodical

126

Issue of the periodical within the volume

21

Country of publishing house

US - UNITED STATES

Number of pages

2

Pages from-to

6532-6533

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—