Kondenzace DNA: Monte-Carlo simulace, rozptyl světla, fluorescneční korelační spektroskopie in vitro a in vivo.
Cíle projektu
Kondenzace DNA hraje klíčovou úlohu při transportu DNA do buněk, tj. v genové terapii. Fluorescenční korelační spektroskopie (FCS) je citlivá metoda ke sledování konformačních změn v průběhu tohoto procesu, jak ukazují mnohé studie provedené v naší skupině. Dosud aplikovaná analýza dat ale zdaleka neposkytuje veškeré informace o studovaném problému. Navrhujeme tedy simulovat pomocí Monte-Carlo volnou difúzi DNA molekuly a z toho plynoucí výsledek FCS experimentu a ten porovnat s reálnými daty a současněs rozptylovými měřeními, která jsou s FCS komplementární. S využitím těchto informací a již získaných zkušeností s kondenzacemi se chceme věnovat studiu nových kondenzačních činidel, tj. efektivitě jejich účinku a schopnosti chránit DNA před nežádoucí hydrolýzou v cytosolu. V posledních třech letech bychom rádi využili zkušenosti získané z experimentů in vitro také při měření in vivo, tj. sledování, v jaké podobě je buňkou akceptovaná DNA přítomná ve významných buněčných organelách.
Klíčová slova
DNA condensationnon-viral gene therapytransfectionfluorescence correlation spectroscopyMonte-Carlo simulationlight scatteringtime-resolved FCScondensing agentsfluoresncence microscopyFLIM (fluorescence lifetime imaging)
Veřejná podpora
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
Program
Granty výrazně badatelského charakteru zaměřené na oblast výzkumu rozvíjeného v současné době zejména v AV ČR
Veřejná soutěž
Výzkumné granty 6 (SAV02006-A)
Hlavní účastníci
—
Druh soutěže
VS - Veřejná soutěž
Číslo smlouvy
IAA400400621
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
DNA Condensation: Monte-Carlo Simulations, Light Scattering, Fluorescence Correlation Spectroscopy in vitro and in vivo.
Anotace anglicky
The DNA condensation is crucial for transport of DNA inside living cells, i.e. for non-viral gene therapy. Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is a very sensitive tool for visualizing the DNA shape changes. However, the obtained data are still poorly understood and therefore lot of information is lost. We suggest employing Monte-Carlo simulations of the FCS output for the given system and comparing them with real measurements. Together with light scattering techniques, common fluorescence studies and time-resolved FCS, we would like to get deeper insight into the process itself and to explore new condensers, i.e. their condensing efficiency and their ability to protect DNA against hydrolysis within cytoplasm. During the last three years we intend to use the in vitro experience for in vivo measurements in order to follow the fate of DNA in cellular compartments of interest after being accepted by cells.
Vědní obory
Kategorie VaV
ZV - Základní výzkum
CEP - hlavní obor
CF - Fyzikální chemie a teoretická chemie
CEP - vedlejší obor
—
CEP - další vedlejší obor
—
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10403 - Physical chemistry
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
Fluorescenšní korelační spektroskopie s měřením dob života byla vyvinuta a používána k vysvětlení mechanismu kondensace molekul DNA. Účinnost nově syntetizovaných kondensačních činidel byla charakterizována a dána do souvislosti s jejich využitím in vivo
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 2006
Ukončení řešení
31. 12. 2010
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
9. 3. 2010
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP11-AV0-IA-U/02:2
Datum dodání záznamu
28. 6. 2013
Finance
Celkové uznané náklady
6 738 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
6 738 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
0 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Základní informace
Uznané náklady
6 738 tis. Kč
Statní podpora
6 738 tis. Kč
100%
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
CEP
CF - Fyzikální chemie a teoretická chemie
Doba řešení
01. 01. 2006 - 31. 12. 2010