Využití bakteriofágů pro rychlou detekci životaschopného původce paratuberkulózy metodou phage assay

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F18%3AN0000241" target="_blank" >RIV/00027162:_____/18:N0000241 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

<a href="http://www.med.muni.cz/tomdny/Sbornik-TD-2018-RV2.pdf" target="_blank" >http://www.med.muni.cz/tomdny/Sbornik-TD-2018-RV2.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Využití bakteriofágů pro rychlou detekci životaschopného původce paratuberkulózy metodou phage assay

Popis výsledku v původním jazyce

XXVII. Tomáškovy dny mladých mikrobiologů. Paratuberkulóza je celosvětově rozšířeným chronickým střevním onemocněním domácích i volně žijících přežvýkavců, které má za následek významné finanční ztráty projevující se v mlékárenském a masném průmyslu. Původcem onemocnění je pomalu rostoucí a ve vnějším prostředí vysoce odolná bakterie Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Typické příznaky onemocnění, jakými jsou chronické hubnutí a chřadnutí, snížená dojivost a průjmy, se mohou dostavit i dva až čtyři roky po infekci, nicméně MAP je masivně vylučována v trusu do prostředí klinicky i subklinicky nemocnými zvířaty. Ty se následně stávají zdrojem infekce pro další zdravé jedince ve stádě. Nedostatek rychlých a specifických detekčních testů k průkazu životaschopných buněk MAP ztěžuje včasnou diagnostiku, která je pro zamezení šíření a eliminaci paratuberkulózy ve stádě nezbytná. Za definitivní diagnostický test pro MAP je v současnosti považována kultivace, nicméně tato metoda je časově velmi náročná a v důsledku nutnosti aplikace chemické dekontaminace k potlačení růstu kompetitivních organismů i méně citlivá. V poslední době hojně využívané metody založené na polymerázové řetězové reakci (PCR) jsou sice více specifické a rychlejší, nedovedou však rozlišit mezi přítomností živých nebo neživých mykobakterií ve vzorku, což může představovat problém při interpretaci výsledků. Phage assay je novým přístupem k diagnostice původce paratuberkulózy. Metoda umožňuje detekci a kvantifikaci životaschopných buněk MAP v různých typech matric včetně mléka, sýru, krve a trusu během 48 hodin. Je založena na schopnosti bakteriofága D29 replikovat se pouze uvnitř živé buňky MAP a následně tuto buňku lyzovat. Počáteční koncentrace buněk ve vzorku je odvozena z počtu plaků vytvořených v důsledku lyze buněk MAP napadených fágem v nárůstu rychle rostoucí bakterie Mycobacterium smegmatis na agarové plotně. Udávaná citlivost metody je jedna až deset živých buněk MAP v jednom mililitru vzorku. V rámci výzkumu bylo metodami konvenční kultivace, real time PCR a phage assay otestováno na přítomnost MAP 20 vzorků lymfatické tkáně a tenkého střeva skotu. Metoda phage assay představuje vhodnou alternativu ke konvenčním kultivačním technikám.

Název v anglickém jazyce

The use of bacteriophages for the rapid detection of viable causative agent of paratuberculosis by the Phage assay

Popis výsledku anglicky

XXVII. Tomasek Days of young microbiologists. Paratuberculosis is a worldwide widespread chronic intestinal disease of domestic and wild ruminants, resulting in significant financial losses in the dairy and meat industries. The causative agent of the disease is slowly growing and in the external environment highly resistant Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Typical symptoms, such as chronic weight loss and wasting, decreased milking and diarrhea, may occur two to four years after infection, however, MAP is massively excreted in the faeces into the environment by clinically and also subclinically ill animals. These are then the source of infection for other healthy individuals in the herd. The lack of rapid and specific tests for detection of viable MAP cells complicates the early diagnosis which is necessary to prevent spreading and eliminate paratuberculosis in the herd. The cultivation is currently considered as definitive diagnostic test for MAP, however, this method is time-consuming, and due to the need to apply chemical decontamination to inhibit the growth of competitive organisms, it is also less sensitive. Recently widely used methods based on polymerase chain reaction (PCR) are more specific and faster, but they can not distinguish between the presence of viable or non-viable mycobacteria in the sample, which may be a problem in interpreting the results. Phage assay is a new approach to the diagnosis of paratuberculosis. The method allows the detection and quantification of viable MAP cells in various matrix types including milk, cheese, blood and faeces within 48 hours. It is based on the ability of the D29 bacteriophage to replicate only within the live MAP cell and then to lysate the cell. The initial concentration of cells in the sample is derived from the number of plaques generated as a result of lysis of phage-infected MAP cells in the growth of fast-growing Mycobacterium smegmatis on an agar plate. The indicated sensitivity of the method is one to ten viable MAP cells per one milliliter sample. During the research, the 20 samples of lymphatic tissue and small intestine of cattle were tested for the presence of MAP by the conventional cultivation, real time PCR and phage assay. The phage assay is a suitable alternative to conventional cultivation techniques.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

10606 - Microbiology

Projekt

<a href="/cs/project/LO1218" target="_blank" >LO1218: Zdravé zvíře jako zdroj zdravé potraviny</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2018

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů