Testování antimikrobiální citlivosti teplotně stabilizovaných endolysinů

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F22%3AN0000261" target="_blank" >RIV/00027162:_____/22:N0000261 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Testování antimikrobiální citlivosti teplotně stabilizovaných endolysinů

Popis výsledku v původním jazyce

Endolysiny jsou peptidoglykanové hydrolázy, které hrají důležitou roli při replikačním cyklu bakteriofágů. Endolysiny vykazují silnou lytickou aktivitu zejména vůči grampozitivním bakteriím. Vývoj teplotně stabilizovaných endolysinů a jejich testování antimikrobiální citlivosti. Gen pro endolysin T1 optimalizovaný pro heterologní expresi v E. coli byl vložen do expresního vektoru pUbEx. Pomocí techniky seamless cloning byl gen upraven na celkem pěti místech. Zvýšení termostability bylo ověřeno pomocí thermal shift assay. Antimikrobiální aktivita rekombinantních enzymů byla testována pomocí měření růstových křivek po dobu 24 hodin na meticilin rezistentních kmenech Staphylococcus aureus (ST 22 a ST30). Mutace RL, GP, a SI vedly ke zvýšení antimikrobiálního působení ve srovnání s původní variantou T1. U kmenu ST 22 byla koncentrace dostačující ke snížení počátečního množství mikroorganismů 3,13 μg/mL (původní varianta T1 6,25 μg/mL). U kmenu ST 30 se potřebná koncentrace enzymu snížila z 12,5 (T1) na 6,25 μg/mL. Antimikrobální efekt těchto nových rekombinantních endolysinů se dále prodloužil až o čtyři hodiny v porovnání s původní variantou T1. Další zavedené kombinace těchto mutací již zřejmě destabilizovaly strukturu endolysinu natolik, že antimikrobiální efekt byl nižší, než v případě původní varianty T1.

Název v anglickém jazyce

Antimicrobial susceptibility testing of temperature-stabilized endolysins

Popis výsledku anglicky

Endolysins are peptidoglycan hydrolases that play an important role in the replication cycle of bacteriophages. Endolysins exhibit strong lytic activity especially against Gram-positive bacteria. Development of temperature-stabilized endolysins and their antimicrobial susceptibility testing. The gene for endolysin T1 optimized for heterologous expression in E. coli was inserted into the expression vector pUbEx. Using a seamless cloning technique, the gene was edited at a total of five sites. The increase in thermostability was verified by thermal shift assay. The antimicrobial activity of the recombinant enzymes was tested by measuring growth curves for 24 hours on methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains (ST22 and ST30). The RL, GP, and SI mutations resulted in increased antimicrobial activity compared to the original T1 variant. In the ST 22 strain, the concentration was sufficient to reduce the initial amount of 3.13 μg/mL (original T1 variant 6.25 μg/mL). For strain ST 30, the required enzyme concentration was reduced from 12.5 (T1) to 6.25 μg/mL. The antimicrobial effect of these new recombinant endolysins was further prolonged by up to four hours compared to the original T1 variant. The additional combinations of these mutations introduced had already apparently destabilized the endolysin structure to such an extent that the antimicrobial effect was lower than that of the original T1 variant.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

30303 - Infectious Diseases

Projekt

<a href="/cs/project/NV19-05-00214" target="_blank" >NV19-05-00214: Studium terapeutické aplikace antibakteriálního krytí rány pro infekce kůže a měkkých tkání u epidemiologicky relevantních kmenů S. aureus - rezistentních na meticilin.</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2022

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů