Optimalizace exprese rekombinantních antigenů pro zvýšení výtěžnosti a testování stability a specifity těchto proteinů pro použití v komerční ELISA soupravě

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F24%3AN0000203" target="_blank" >RIV/00027162:_____/24:N0000203 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Optimalizace exprese rekombinantních antigenů pro zvýšení výtěžnosti a testování stability a specifity těchto proteinů pro použití v komerční ELISA soupravě

Popis výsledku v původním jazyce

Předkládaný funkční vzorek popisuje metodiku produkce dvou rekombinantních proteinů, jež jsou základem DIVA ELISA testu, který dokáže sérologicky rozlišit prasata vakcinovaná inaktivovanou vakcínou BioSuis Salm, chránící novorozená selata před salmonelovými infekcemi, od prasat infikovaných netyfoidními kmeny salmonel a od prasat negativních na přítomnost patogenu. Oba antigeny pocházejí z bakterie Salmonella Typhimurium a jsou exprimovány v expresním systému založeném na bakteriích Escherichia coli. Komerční ELISA souprava vyžaduje vysokou specifitu antigenů, ve smyslu rozlišení zmíněných tří skupin prasat, dostatečnou citlivost, ale také rozumnou míru nákladů na její přípravu, což zvyšuje konkurenceschopnost takovéto soupravy a v konečném důsledku i zmíněné vakcíny, která byla vyvinuta na pracovišti autorů. Základem produkce antigenů jsou dvě jednoduché purifikační metody, které umožňují přípravu dostatečně čistých rekombinantních proteinů ve velmi krátkém čase. Optimalizace všech kroků od návrhu konstruktu až po finální ELISA testování je pak stěžejní pro splnění všech zmíněných parametrů.

Název v anglickém jazyce

Optimization of Recombinant Antigen Expression to Enhance Yield and Test the Stability and Specificity of These Proteins for Use in a Commercial ELISA Kit

Popis výsledku anglicky

The presented functional sample describes a methodology for the production of two recombinant proteins that form the basis of the DIVA ELISA test. This test can serologically distinguish pigs vaccinated with the inactivated BioSuis Salm vaccine, which protects newborn piglets against salmonella infections, from pigs infected with non-typhoidal salmonella strains and from pigs negative for the presence of the pathogen. Both antigens are derived from Salmonella Typhimurium and are expressed in a bacterial expression system based on Escherichia coli. A commercial ELISA kit requires high antigen specificity to differentiate between the aforementioned three groups of pigs, sufficient sensitivity, and reasonable production costs. These factors enhance the competitiveness of such an ELISA kit and, ultimately, of the vaccine itself, which was developed by the authors' institution. The antigen production relies on two simple purification methods that enable the preparation of sufficiently pure recombinant proteins in a very short time. Optimization of all steps, from construct design to final ELISA testing, is crucial to meeting the required parameters.

Druh

G_funk - Funkční vzorek

CEP obor

—

OECD FORD obor

40301 - Veterinary science

Projekt

<a href="/cs/project/TQ03000656" target="_blank" >TQ03000656: Vývoj DIVA ELISA testu rozlišujícího prasata infikovaná netyfoidními sérotypy salmonel a prasata vakcinovaná proti těmto sérotypům</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Rok uplatnění

2024

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Interní identifikační kód produktu

6758/2024

Číselná identifikace

—

Technické parametry

Podstatou funkčního vzorku je příprava dvou rekombinantních proteinů, jejichž využitím v ELISA metodě je možné sérologicky rozlišit prasata vakcinovaná od prasat infikovaných bakterií Salmonella Typhimurium. Základem pro přípravu těchto dvou antigenů je produkce v expresním systému Escherichia coli a následná izolace a purifikace dvěma metodami – afinitní chromatografie pomocí HisTagové kotvy a následná eluce z gelu po SDS-PAGE gelové elektroforéze. Celý tento proces je možné provést během 4-5 dní s vysokým výtěžkem a čistotou proteinu přesahující 90 %. Takto připravené antigeny jsou v ELISA testu stabilní nejméně po dobu 6 měsíců a s vysokou spolehlivostí jsou schopny sérologicky rozlišit zmíněné skupiny zvířat.

Ekonomické parametry

Díky použitému expresnímu systému a zvoleným metodám purifikace a jejich optimalizací jsme schopni vyrobit oba antigeny v krátkém čase s vysokými výtěžky, vysokou čistotou a malou ztrátou materiálu, což snižuje náklady na jejich produkci. To se odrazí v ceně navazující ELISA soupravy a v konečném důsledku tak zvýší konkurenceschopnost takovéto soupravy, ale i využitelnost vakcíny BioSuis Salm (vyvinutou týmem autorů společně se společností Bioveta, a.s. do komerční podoby), která je s diagnostickým ELISA testem úzce propojená.

Kategorie aplik. výsledku dle nákladů

—

IČO vlastníka výsledku

00027162

Název vlastníka

Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i.

Stát vlastníka

CZ - Česká republika

Druh možnosti využití

V - Výsledek je využíván vlastníkem

Požadavek na licenční poplatek

Z - Poskytovatel licence na výsledek nepožaduje v některých případech licenční poplatek

Adresa www stránky s výsledkem

—