Využití metody PLA pro detekci komplexů p53/p63/p73 in situ v nádorových buňkách a nádorové tkáni

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00209805%3A_____%2F17%3A00077799" target="_blank" >RIV/00209805:_____/17:00077799 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

<a href="https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/213.pdf" target="_blank" >https://www.linkos.cz/files/klinicka-onkologie/213.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Využití metody PLA pro detekci komplexů p53/p63/p73 in situ v nádorových buňkách a nádorové tkáni

Popis výsledku v původním jazyce

Východiska: PLA (proximity ligation assay) je metoda umožňující detekovat protein-proteinové interakce in situ přímo v buňce nebo tkáni. Její hlavní výhodou je vysoká citlivost a specifi - cita umožňující detekovat, lokalizovat a kvantifi kovat proteinové komplexy s vysokým rozlišením až jednotlivých molekul. Jedním z mechanizmů &quot;gain of function&quot; mutovaného p53 je tvorba komplexů s dalšími členy proteinové rodiny p53 - p63 a p73. Tyto interakce pak mají přímý vliv na chemosenzitivitu nádorových buněk a jejich invazivní potenciál, a proto jsou komplexy p53/ p63/ p73 nadějným cílem protinádorové terapie. Cílem této práce je prokázat existenci komplexů p53/ p63/ p73 in situ v nádorových buňkách a v nádorové tkáni na parafi - nových řezech s využitím metody PLA. Materiál a metody: Pro detekci izoforem p63 a p73 byly na našem pracovišti charakterizovány unikátní specifi cké protilátky. Proteinové komplexy byly detekovány metodou PLA ve stabilních buněčných liniích SVK14, HCC1806 a FaDu a na parafi nových řezech z tkáně kolorektálního karcinomu. Buněčné linie byly zpracovány do parafi nových bloků, aby je bylo možné využít jako model pro optimalizaci protokolu pro barvení tkáňových řezů. Výsledky: V buňkách SVK14 exprimujících virový T antigen jsme metodou PLA detekovali komplex p53/T antigen a ΔNp63/T antigen. Interakci izoforem ΔNp63 a TAp73 jsme zaznamenali v linii HCC1806 s endogenní expresí těchto proteinů. V linii FaDu byl lokalizován komplex mut-p53/ TAp73, ne však mut-p53/ ΔNp63. Přímo v nádorové tkáni kolorektálního karcinomu se podařilo detekovat tetramer mutovaného p53. Závěr: V rámci vývoje metody PLA pro detekci komplexů proteinů z rodiny p53 jsme v nádorových buněčných liniích detekovali komplexy p53 a p63 s T antigenem, komplexy mutovaného p53 a ΔNp63 s nádorovým supresorem TAp73 a na parafi nových řezech kolorektálního karcinomu tetramery p53. Další vývoj metody bude směřovat k detekci komplexů p53/ p63, p53/ p73 a p63/ p73 v nádorové tkáni a testování možnosti využití PLA pro screening látek blokujících tvorbu těchto komplexů.

Název v anglickém jazyce

Application of PLA method for detection of p53/p63/p73 complexex in situ in tumour cells and tumour tissue

Popis výsledku anglicky

Background: PLA (proximity ligation assay) can be used for detection of protein-protein interactions in situ directly in cells and tissues. Due to its high sensitivity and specifi city it is useful for detection, localization and quantifi cation of protein complexes with single molecule resolution. One of the mechanisms of mutated p53 gain of function is formation of proten-protein complexes with other members of p53 family - p63 and p73. These interactions infl uences chemosensitivity and invasivity of cancer cells and this is why these complexes are potential targets of anti- -cancer therapy. The aim of this work is to detect p53/ p63/ p73 interactions in situ in tumour cells and tumour tissue using PLA method. Material and Methods: Unique in-house antibodies for specifi c detection of p63 and p73 isoforms were developed and characterized. Potein complexes were detected using PLA in established cell lines SVK14, HCC1806 and FaDu and in paraffi n sections of colorectal carcinoma tissue. Cell lines were also processed to paraffi n blocks. Results: p53/ T-antigen and ΔNp63/ T-antigen protein complexes were detected in SVK14 cells using PLA. Interactions of ΔNp63 and TAp73 isoforms were found in HCC1806 cell line with endogenous expression of these proteins. In FaDu cell line mut-p53/ TAp73 complex was localized but not mut-p53/ ΔNp63 complex. p53 tetramer was detected directly in colorectal cancer tissue. Conclusion: During development of PLA method for detection of protein complexes between p53 family members we detected interactions of p53 and p63 with T-antigen and mut-p53 and ΔNp63 with TAp73 tumour suppressor in tumour cell lines and p53 tetramers in paraffi n sections of colorectal cancer tissue. PLA will be further used for detection of p53/ p63, p53/ p73 and p63/ p73 interactions in tumour tissues and it could be also used for screening of compounds that can block formation of p53/ p63/ p73 protein complexes.

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

—

OECD FORD obor

30204 - Oncology

Projekt

<a href="/cs/project/LO1413" target="_blank" >LO1413: RECAMO2020</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2017

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

Klinická onkologie

ISBN

—

ISSN

0862-495X

e-ISSN

1802-5307

Počet stran výsledku

3

Strana od-do

"S159"-"S162"

Název nakladatele

Česká lékařská společnost J.E. Purkyně

Místo vydání

Praha

Místo konání akce

Brno

Datum konání akce

26. 4. 2017

Typ akce podle státní příslušnosti

CST - Celostátní akce

Kód UT WoS článku

—