Stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu pomocí kapalinové chromatografie s fluorimetrickou detekcí
Popis výsledku
Vyvinuli jsme metodu pro stanovení redukovaného i oxidovaného glutathionu v plazmě, erytrocytech a hepatocytech. Redukovaný glutathion (GSH) reaguje při pH 8 s orthoftalaldehydem (OPA) za vzniku stabilního a vysoce fluoreskujícího tricyklického derivátu,zatímco oxidovaný gltathion (GSSG) reaguje s OPA při pH 12. Při stanovení GSSG byl GSH maskován N-ethylmaleimidem. Pro separaci jsme jako stacionární fázi použili chromatografickou kolonu Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um. Jako mobilní fáze byla použita směs methanolu a 25 mmol/l fosfátového pufru (15:85, v/v), pH 6,00. Bylo dosaženo znamenité výtěžnosti. Variační koeficient pro přesnost v sérii byl 3,8% a pro přesnost mezi sériemi 5,2%. Výtěžnost metody byla mezi 95 a 105% a mez detekce byl 0,1 pmol derivátu. Vyvinuli jsme vysoce selektivní, citlivou a rychlou metodu pro stanovení redukovaného a oxidovaného glutathionu v biologických vzorcích.
Klíčová slova
Identifikátory výsledku
Kód výsledku v IS VaVaI
Výsledek na webu
—
DOI - Digital Object Identifier
—
Alternativní jazyky
Jazyk výsledku
angličtina
Název v původním jazyce
Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection
Popis výsledku v původním jazyce
A method for measurement of both reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in plasma, erythrocytes and hepatocytes has been developed and evaluated. Reduced glutathione reacts with orthophthaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8, while GSSG reacts with OPA at pH 12. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, reverse phase column Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um, was used. The mixture of methanol and 25 mmol/l phosphate buffer (15:85, v/v), pH 6.00, was used as mobile phase. Excellent linearity was achieved. The intra- and inter-assay coefficient of variation was 3.8% and 5.2%, respectively. The recovery was 95-105%, and limit of detection was 0.1 pmol of glutathione adduct. We have developed highly selective, sensitivite and rapid method for measurement of both GSH and GSSG in biological samples.
Název v anglickém jazyce
Determination of both reduced and oxidised glutathione using liquid chromatography with fluorimetric detection
Popis výsledku anglicky
A method for measurement of both reduced (GSH) and oxidized (GSSG) glutathione in plasma, erythrocytes and hepatocytes has been developed and evaluated. Reduced glutathione reacts with orthophthaldehyde (OPA) to form a stable, highly fluorescent tricyclic derivate at pH 8, while GSSG reacts with OPA at pH 12. At measurement of GSSG, GSH was complexed to N-ethylmaleimide. For the separation, reverse phase column Discovery C18, 150 x 4 mm, 5 um, was used. The mixture of methanol and 25 mmol/l phosphate buffer (15:85, v/v), pH 6.00, was used as mobile phase. Excellent linearity was achieved. The intra- and inter-assay coefficient of variation was 3.8% and 5.2%, respectively. The recovery was 95-105%, and limit of detection was 0.1 pmol of glutathione adduct. We have developed highly selective, sensitivite and rapid method for measurement of both GSH and GSSG in biological samples.
Klasifikace
Druh
D - Stať ve sborníku
CEP obor
CB - Analytická chemie, separace
OECD FORD obor
—
Návaznosti výsledku
Projekt
—
Návaznosti
Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)
Ostatní
Rok uplatnění
2005
Kód důvěrnosti údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Údaje specifické pro druh výsledku
Název statě ve sborníku
Clin. Chim. Acta suppl.
ISBN
0009-8981
ISSN
—
e-ISSN
—
Počet stran výsledku
1
Strana od-do
220
Název nakladatele
Elsevier
Místo vydání
UK
Místo konání akce
Glasgow, Skotsko
Datum konání akce
8. 5. 2005
Typ akce podle státní příslušnosti
WRD - Celosvětová akce
Kód UT WoS článku
—
Druh výsledku
D - Stať ve sborníku
CEP
CB - Analytická chemie, separace
Rok uplatnění
2005