VYUŽITÍ IMOBILIZOVANÉHO LYSOZYMU PRO IDENTIFIKACI BAKTERIÁLNÍCH PROTEINŮ HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216275%3A25310%2F11%3A39881877" target="_blank" >RIV/00216275:25310/11:39881877 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

VYUŽITÍ IMOBILIZOVANÉHO LYSOZYMU PRO IDENTIFIKACI BAKTERIÁLNÍCH PROTEINŮ HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ

Popis výsledku v původním jazyce

Cílem této práce bylo připravit účinný nosič s imobilizovaným enzymem lysozymem pro efektivní narušení buněčné stěny G+ bakterií a získat tak materiál pro rychlou a reprodukovatelnou analýzu bakteriálního proteomu hmotnostní spektrometrií. Bylo nutné vytipovat a zavést jednoduchou metodu pro stanovení aktivity enzymu lysozymu a následně připravit nosič, kde bude enzym kovalentně vázán tak, aby jeho aktivita a stabilita byla zachována i během opakovaného použití. Pro naše účely se osvědčila citlivá spektrofluorimetrická metoda pomocí 4-methylumbelliferyl-beta-D-N,N',N''-triacetylchito-triosidu. Lysozym byl imobilizován na magnetické částice s různými funkčními skupinami, velikostí částic i porozitou. Na základě výsledků byl vybrán nejvhodnější nosič, ukterého byla stanovena skladovací a operační stabilita. Vázaná i volná forma enzymu byly poté použity k přípravě vzorků G+bakterií určených k MALDI-TOF-MS identifikaci a výsledky byly porovnány s tradiční přípravou bakteriálních vzorků pr

Název v anglickém jazyce

Utilization of immobilized lysozyme for identification of bacterial proteins by mass spectrometry

Popis výsledku anglicky

The goal of this study was to develop an active carrier with immobilized enzyme lysozyme for effective disruption of G+ bacteria cell wall and obtain material for rapid and reproducible analysis of bacterial proteome by MS. Efficient method for determination of Lysozyme activity has been estimated and followed by immobilization of enzyme to the magnetic carrier. Final activity, stability and reaction conditions of immobilized enzyme were estimated. Spectrofluorimetric measurement of lysozyme activity with 4-methylumbelliferyl-beta-D-N,N',N''-triacetylchitotrioside was found to be the most beneficial. To find the best active system the lysozyme was immobilized to the magnetic particles with different functional groups, size and porosity. The most convenient carrier with immobilized lysozyme has been selected, in which the storage and operational stability were determined. The results of total proteome analysis by MALDI-TOF-MS were compared with results obtained by traditional preanalyti

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

CB - Analytická chemie, separace

OECD FORD obor

—

Projekt

<a href="/cs/project/GA203%2F09%2F0857" target="_blank" >GA203/09/0857: Nové analytické postupy k identifikaci proteinů spjatých s virulencí a patogenezí bakteriálních kmenů</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)<br>S - Specificky vyzkum na vysokych skolach

Rok uplatnění

2011

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

Sborník příspěvků ze semináře Monitorování cizorodých látek v životním prostredí XIII.

ISBN

978-80-7395-450-5

ISSN

—

e-ISSN

—

Počet stran výsledku

11

Strana od-do

51-62

Název nakladatele

Univerzita Pardubice

Místo vydání

Pardubice

Místo konání akce

Luka nad Jihlavou

Datum konání akce

20. 9. 2011

Typ akce podle státní příslušnosti

CST - Celostátní akce

Kód UT WoS článku

—