Two Tags in One Probe: Combining Fluorescence- and Biotin-based Detection of the Trypanosomal Cysteine Protease Rhodesain

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60077344%3A_____%2F22%3A00561246" target="_blank" >RIV/60077344:_____/22:00561246 - isvavai.cz</a>

Nalezeny alternativní kódy

RIV/61388963:_____/22:00561246 RIV/60076658:12310/22:43905078

Výsledek na webu

<a href="https://doi.org/10.1002/chem.202201636" target="_blank" >https://doi.org/10.1002/chem.202201636</a>

DOI - Digital Object Identifier

<a href="http://dx.doi.org/10.1002/chem.202201636" target="_blank" >10.1002/chem.202201636</a>

Jazyk výsledku

angličtina

Název v původním jazyce

Two Tags in One Probe: Combining Fluorescence- and Biotin-based Detection of the Trypanosomal Cysteine Protease Rhodesain

Popis výsledku v původním jazyce

Rhodesain is the major cysteine protease of the protozoan parasite Trypanosoma brucei and a therapeutic target for sleeping sickness, a fatal neglected tropical disease. We designed, synthesized and characterized a bimodal activity-based probe that binds to and inactivates rhodesain. This probe exhibited an irreversible mode of action and extraordinary potency for the target protease with a k(inac)/K-i value of 37,000 M(-1)s(-1). Two reporter tags, a fluorescent coumarin moiety and a biotin affinity label, were incorporated into the probe and enabled highly sensitive detection of rhodesain in a complex proteome by in-gel fluorescence and on-blot chemiluminescence. Furthermore, the probe was employed for microseparation and quantification of rhodesain and for inhibitor screening using a competition assay. The developed bimodal rhodesain probe represents a new proteomic tool for studying Trypanosoma pathobiochemistry and antitrypanosomal drug discovery.

Název v anglickém jazyce

Two Tags in One Probe: Combining Fluorescence- and Biotin-based Detection of the Trypanosomal Cysteine Protease Rhodesain

Popis výsledku anglicky

Rhodesain is the major cysteine protease of the protozoan parasite Trypanosoma brucei and a therapeutic target for sleeping sickness, a fatal neglected tropical disease. We designed, synthesized and characterized a bimodal activity-based probe that binds to and inactivates rhodesain. This probe exhibited an irreversible mode of action and extraordinary potency for the target protease with a k(inac)/K-i value of 37,000 M(-1)s(-1). Two reporter tags, a fluorescent coumarin moiety and a biotin affinity label, were incorporated into the probe and enabled highly sensitive detection of rhodesain in a complex proteome by in-gel fluorescence and on-blot chemiluminescence. Furthermore, the probe was employed for microseparation and quantification of rhodesain and for inhibitor screening using a competition assay. The developed bimodal rhodesain probe represents a new proteomic tool for studying Trypanosoma pathobiochemistry and antitrypanosomal drug discovery.

Druh

J_imp - Článek v periodiku v databázi Web of Science

CEP obor

—

OECD FORD obor

10606 - Microbiology

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Rok uplatnění

2022

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název periodika

Chemistry - A European Journal

ISSN

0947-6539

e-ISSN

1521-3765

Svazek periodika

28

Číslo periodika v rámci svazku

62

Stát vydavatele periodika

DE - Spolková republika Německo

Počet stran výsledku

11

Strana od-do

e202201636

Kód UT WoS článku

000850603500001

EID výsledku v databázi Scopus

2-s2.0-85137594800