Vše

Co hledáte?

Vše
Projekty
Výsledky výzkumu
Subjekty

Rychlé hledání

  • Projekty podpořené TA ČR
  • Významné projekty
  • Projekty s nejvyšší státní podporou
  • Aktuálně běžící projekty

Chytré vyhledávání

  • Takto najdu konkrétní +slovo
  • Takto z výsledků -slovo zcela vynechám
  • “Takto můžu najít celou frázi”

Mutation Hotspot for Changing the Substrate Specificity of beta-N-Acetylhexosaminidase: A Library of GlcNAcases

Identifikátory výsledku

  • Kód výsledku v IS VaVaI

    <a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F61388971%3A_____%2F22%3A00563832" target="_blank" >RIV/61388971:_____/22:00563832 - isvavai.cz</a>

  • Výsledek na webu

    <a href="https://www.mdpi.com/1422-0067/23/20/12456" target="_blank" >https://www.mdpi.com/1422-0067/23/20/12456</a>

  • DOI - Digital Object Identifier

    <a href="http://dx.doi.org/10.3390/ijms232012456" target="_blank" >10.3390/ijms232012456</a>

Alternativní jazyky

  • Jazyk výsledku

    angličtina

  • Název v původním jazyce

    Mutation Hotspot for Changing the Substrate Specificity of beta-N-Acetylhexosaminidase: A Library of GlcNAcases

  • Popis výsledku v původním jazyce

    beta-N-Acetylhexosaminidase from Talaromyces flavus (TfHex, EC 3.2.1.52) is an exo-glycosidase with dual activity for cleaving N-acetylglucosamine (GlcNAc) and N-acetylgalactosamine (GalNAc) units from carbohydrates. By targeting a mutation hotspot of the active site residue Glu332, we prepared a library of ten mutant variants with their substrate specificity significantly shifted towards GlcNAcase activity. Suitable mutations were identified by in silico methods. We optimized a microtiter plate screening method in the yeast Pichia pastoris expression system, which is required for the correct folding of tetrameric fungal beta-N-acetylhexosaminidases. While the wild-type TfHex is promiscuous with its GalNAcase/GlcNAcase activity ratio of 1.2, the best single mutant variant Glu332His featured an 8-fold increase in selectivity toward GlcNAc compared with the wild-type. Several prepared variants, in particular Glu332Thr TfHex, had significantly stronger transglycosylation capabilities than the wild-type, affording longer chitooligomers they behaved like transglycosidases. This study demonstrates the potential of mutagenesis to alter the substrate specificity of glycosidases.

  • Název v anglickém jazyce

    Mutation Hotspot for Changing the Substrate Specificity of beta-N-Acetylhexosaminidase: A Library of GlcNAcases

  • Popis výsledku anglicky

    beta-N-Acetylhexosaminidase from Talaromyces flavus (TfHex, EC 3.2.1.52) is an exo-glycosidase with dual activity for cleaving N-acetylglucosamine (GlcNAc) and N-acetylgalactosamine (GalNAc) units from carbohydrates. By targeting a mutation hotspot of the active site residue Glu332, we prepared a library of ten mutant variants with their substrate specificity significantly shifted towards GlcNAcase activity. Suitable mutations were identified by in silico methods. We optimized a microtiter plate screening method in the yeast Pichia pastoris expression system, which is required for the correct folding of tetrameric fungal beta-N-acetylhexosaminidases. While the wild-type TfHex is promiscuous with its GalNAcase/GlcNAcase activity ratio of 1.2, the best single mutant variant Glu332His featured an 8-fold increase in selectivity toward GlcNAc compared with the wild-type. Several prepared variants, in particular Glu332Thr TfHex, had significantly stronger transglycosylation capabilities than the wild-type, affording longer chitooligomers they behaved like transglycosidases. This study demonstrates the potential of mutagenesis to alter the substrate specificity of glycosidases.

Klasifikace

  • Druh

    J<sub>imp</sub> - Článek v periodiku v databázi Web of Science

  • CEP obor

  • OECD FORD obor

    10608 - Biochemistry and molecular biology

Návaznosti výsledku

  • Projekt

    Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

  • Návaznosti

    I - Institucionalni podpora na dlouhodoby koncepcni rozvoj vyzkumne organizace

Ostatní

  • Rok uplatnění

    2022

  • Kód důvěrnosti údajů

    S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Údaje specifické pro druh výsledku

  • Název periodika

    International Journal of Molecular Sciences

  • ISSN

    1422-0067

  • e-ISSN

    1422-0067

  • Svazek periodika

    23

  • Číslo periodika v rámci svazku

    20

  • Stát vydavatele periodika

    CH - Švýcarská konfederace

  • Počet stran výsledku

    17

  • Strana od-do

    12456

  • Kód UT WoS článku

    000872833300001

  • EID výsledku v databázi Scopus

    2-s2.0-85140984333