Vývoj LC-MS/MS metody pro stanovení biomarkerů atypické myopatie koní ze suché krevní skvrny

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F62157124%3A16170%2F24%3A43881735" target="_blank" >RIV/62157124:16170/24:43881735 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Vývoj LC-MS/MS metody pro stanovení biomarkerů atypické myopatie koní ze suché krevní skvrny

Popis výsledku v původním jazyce

Atypická myopatie (AM) je onemocnění provázené akutní rhabdomyolýzou a postihuje koně na pastvě. Příčinou rozvoje tohoto onemocnění je intoxikace hypoglycinem A (HGA) a methylencyklopropylglycinem (MCPrG) přítomných v některých druzích javoru (Acer). Tyto neproteinogenní aminokyseliny se po pozření v těle zvířat metabolizují a způsobují inhibici β-oxidace mastných kyselin.V České republice bylo mezi lety 2011−2020 evidováno celkem 112 případů AM. V Evropě průměrně tři čtvrtiny pacientů umírají do 72 hodin od prvních příznaků. S tím souvisí problematika rychlosti a dostupnosti diagnostiky, která je v progresi tohoto onemocnění stěžejní. Toxiny způsobující AM se v laboratořích ale neanalyzují rutinně. V ČR jsou zavedeny metody pro stanovení toxinů pouze v Laboratoři dědičných metabolických poruch Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci a v toxikologické laboratoři Ústavu ochrany a welfare zvířat a veřejného veterinárního lékařství Veterinární univerzity Brno. Jednou z analytických technik, která odpovídá výše zmíněným požadavkům diagnostiky, je kapalinová chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). Dosavadní LC-MS/MS metody pro analýzu diagnosticky významných látek ze suchých krevních skvrn (DBS) však zahrnují derivatizaci analytů, což významně prodlužuje dobu přípravy vzorku. V této práci byla vyvinuta a částečně validována LC-MS/MS metoda bez nutnosti derivatizace analytů ve vzorku. Metoda se vyznačuje jednodušší a kratší přípravou vzorku (zkrácení ze 2 dnů na přibližně 4 hodiny), krátkou dobou analýzy (9 minut) a nízkou finanční nákladovostí. Touto metodou lze stanovit toxiny prokazující AM, konkrétně HGA a MCPrG a metabolit odvozený od HGA – methylencyklopropylacetyl-karnitin (MCPA-karnitin), dále také osm acylkarnitinů a čtyři acylglyciny signifikantně se zvyšující v krvi koní s AM.Nově vyvinutá LC-MS/MS metoda má potenciál pro zavedení do rutinní diagnostické praxe, což by umožnilo rychlou diagnostiku pacientů, včasné nasazení léčby a příznivé ovlivnění progrese AM.

Název v anglickém jazyce

Development of an LC-MS/MS method for the determination of biomarkers of atypical equine myopathy from dry blood spots

Popis výsledku anglicky

Atypical myopathy (AM) is a disease accompanied by acute rhabdomyolysis and affects horses on pasture. The cause of the development of this disease is intoxication with hypoglycin A (HGA) and methylcyclopropylglycine (MCPrG) present in some species of maple (Acer). These non-proteinogenic amino acids are metabolized in the animal body after ingestion and cause inhibition of β-oxidation of fatty acids.A total of 112 cases of AM2 were registered in the Czech Republic between 2011-2020. In Europe, on average, three quarters of patients die within 72 hours of first symptoms. However, AM toxins are not routinely analysed in laboratories. In the Czech Republic, methods for the determination of toxins are established only in the Laboratory of Inherited Metabolic Disorders of the Faculty of Medicine of Palacký University in Olomouc and in the toxicological laboratory of the Institute of Animal Protection and Welfare and Public Veterinary Medicine of the Veterinary University Brno. However, existing LC-MS/MS methods for the analysis of diagnostically relevant substances from dry blood spots (DBS) involve derivatisation of analytes, which significantly increases the sample preparation time. In this work, an LC-MS/MS method without the need for derivatization of the analytes in the sample was developed and partially validated. The method is characterized by simpler and shorter sample preparation (reduction from 2 days to approximately 4 hours), short analysis time (9 minutes) and low financial cost. This method can be used to determine AM toxins, namely HGA and MCPrG and the HGA-derived metabolite methylcyclopropylacetylcarnitine (MCPA-carnitine), as well as eight acylcarnitines and four acylglycines significantly increasing in the blood of horses with AM.The newly developed LC-MS/MS method has the potential to be introduced into routine diagnostic practice, which would allow rapid diagnosis of patients, early treatment deployment and favorable influence on AM progression.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

40301 - Veterinary science

Projekt

<a href="/cs/project/QL24010403" target="_blank" >QL24010403: Diagnostika a možnosti prevence atypické myopatie koní v podmínkách České republiky</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2024

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů