The optimization of the method for the detection of viral particles in meat and meat products

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F19%3AN0000278" target="_blank" >RIV/00027162:_____/19:N0000278 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Optimalizace metody pro detekci virových částic v mase a masných výrobcích

Original language description

XXIII. Celostátní konference virologů – Hradecké virologické dny, 22. – 23.10. 2019, přednáška. Mezi nejvýznamnější virové patogeny přenášené potravinami se řadí zejména virus hepatitidy A a noroviry. Tato agens jsou odpovědná za vznik četných epidemií s významným dopadem na zdraví obyvatelstva, přičemž jako vehikulum může sloužit jakákoli potravina rostlinného i živočišného původu. Kvůli omezení jejich šíření a propuknutí epidemií spojených s kontaminovanými potravinami je nutná včasná a spolehlivá detekce těchto agens. Jejím nezbytným předpokladem je dostatečně efektivní izolace virových částic, nebo přímo virových nukleových kyselin z dané potraviny. Pro některé matrice, např. drobné ovoce, zelenina, mořské plody a pitná voda jsou tyto metody již standardizovány (ISO 15216-1). Pro maso a lahůdkové masné výrobky standardizace zatím neexistuje. Proto cílem současných studií je vývoj a optimalizace metod pro izolaci virových částic nebo virových nukleových kyselin z masa a masných výrobků. K tomuto účelu byly vybrané vzorky masa a masných výrobků uměle kontaminovány částicemi in vitro připraveného bakteriofága MS2. Následně byly provedeny tři typy oplachů alkalickými elučními roztoky pro získání virových částic a dva typy oplachu lyzačními roztoky pro přímou izolaci nukleových kyselin (TRIreagent®). Obsah cílových virových nukleových kyselin byl kvantifikován RT-qPCR. Po srovnání výtěžnosti uvedených postupů byla stanovena metoda, která pro většinu uvedených matric poskytovala nejvyšší účinnost a robustnost. Srovnáním metod oplachu v alkalickém prostředí a oplachu pomocí TRIreagent® bylo pozorováno, že alkalická eluce je mnohem méně účinná ve srovnání s přímou izolaci nukleových kyselin. Z toho důvodu byly následně porovnány metody pro přímou izolaci nukleových kyselin – koncentrovaný TRIreagent® a směs TRIreagent®+PBS. Dle získaných výsledků přímá izolace nukleových kyselin z matrice se jeví jako nejvhodnější metoda izolace pro matrice masa a masných výrobků. TRIreagent® s PBS poskytuje řádově srovnatelné výsledky ve srovnání s koncentrovaným roztokem TRIreagent®. Tento postup poskytne vhodné řešení problematické analýzy potravin živočišného původu.

Czech name

Optimalizace metody pro detekci virových částic v mase a masných výrobcích

Czech description

XXIII. Celostátní konference virologů – Hradecké virologické dny, 22. – 23.10. 2019, přednáška. Mezi nejvýznamnější virové patogeny přenášené potravinami se řadí zejména virus hepatitidy A a noroviry. Tato agens jsou odpovědná za vznik četných epidemií s významným dopadem na zdraví obyvatelstva, přičemž jako vehikulum může sloužit jakákoli potravina rostlinného i živočišného původu. Kvůli omezení jejich šíření a propuknutí epidemií spojených s kontaminovanými potravinami je nutná včasná a spolehlivá detekce těchto agens. Jejím nezbytným předpokladem je dostatečně efektivní izolace virových částic, nebo přímo virových nukleových kyselin z dané potraviny. Pro některé matrice, např. drobné ovoce, zelenina, mořské plody a pitná voda jsou tyto metody již standardizovány (ISO 15216-1). Pro maso a lahůdkové masné výrobky standardizace zatím neexistuje. Proto cílem současných studií je vývoj a optimalizace metod pro izolaci virových částic nebo virových nukleových kyselin z masa a masných výrobků. K tomuto účelu byly vybrané vzorky masa a masných výrobků uměle kontaminovány částicemi in vitro připraveného bakteriofága MS2. Následně byly provedeny tři typy oplachů alkalickými elučními roztoky pro získání virových částic a dva typy oplachu lyzačními roztoky pro přímou izolaci nukleových kyselin (TRIreagent®). Obsah cílových virových nukleových kyselin byl kvantifikován RT-qPCR. Po srovnání výtěžnosti uvedených postupů byla stanovena metoda, která pro většinu uvedených matric poskytovala nejvyšší účinnost a robustnost. Srovnáním metod oplachu v alkalickém prostředí a oplachu pomocí TRIreagent® bylo pozorováno, že alkalická eluce je mnohem méně účinná ve srovnání s přímou izolaci nukleových kyselin. Z toho důvodu byly následně porovnány metody pro přímou izolaci nukleových kyselin – koncentrovaný TRIreagent® a směs TRIreagent®+PBS. Dle získaných výsledků přímá izolace nukleových kyselin z matrice se jeví jako nejvhodnější metoda izolace pro matrice masa a masných výrobků. TRIreagent® s PBS poskytuje řádově srovnatelné výsledky ve srovnání s koncentrovaným roztokem TRIreagent®. Tento postup poskytne vhodné řešení problematické analýzy potravin živočišného původu.

Type

O - Miscellaneous

CEP classification

—

OECD FORD branch

10607 - Virology

Project

Result was created during the realization of more than one project. More information in the Projects tab.

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2019

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů