Identification of viable Lactobacillus cells in fermented diary products

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216305%3A26310%2F08%3APU79573" target="_blank" >RIV/00216305:26310/08:PU79573 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

angličtina

Original language name

Identification of viable Lactobacillus cells in fermented diary products

Original language description

The combination PCR and ethidium monoazide (EMA-PCR) is a new metod for selective distinction between viable and dead bacterial cells. The general application of EMA is based on penetration into 'dead' cells with compromised membráně (cell wall systems)integrity. DNA bound to EMA cannot be PCR amplified. Live cells remain intact and only DNA from viable cells can be amplified. Experiments were performed using probiotic bacterial strain Lactobacillus paracasei subsp. paracasei CCDM 211/06 of human origin. The experimental conditions (time of cell incubation with EMA, and cell irradiation) were optimized. In the next step instead for live-dead cell distinction propidium monoazide was used. The Lactobacillus species specific primers were used for DNA amplification. The PCR products (250 bp) were separated using electrophoresis in 1.8 % agarose gel. The method was applied for live and dead cells identification in milk product (yoghurt).

Czech name

Identifikace živých bakteriálních buněk rodu Lactobacillus v mléčných výrobcích

Czech description

Kombinace a PCR ethidium monoazide (EMA-PCR) je nová metoda pro selektivní rozlišení mezi životaschopnými a usmrcenými bakteriálními buňkami. Metoda je založena na poznatku, že EMA muže proniknout do cytoplasmy a k DNA usmrcených buněk v důsledku nefunkčnosti buněčné membrány (stěny). Fotoaktivací se EMA kovalentně váže na DNA, která se proto neamplifikuje v PCR. V PCR se amplifikuje jen DNA živých buněk Stanovení bylo provedeno za použití probiotických bakterií Lactobacillus paracasei ssp. paracasei CCDM 211/06 nově izolovaného z lidských zdrojů. Byly optimalizovány experimentální podmínky (doba inkubace buněk s EMA, a ozařování buněk). V dalším kroku byl EMA nahrazen propidium monoazidem (PMA) a bylo provedeno porovnání výsledků působení. PCR reakcebyla prováděna za využití primerů specifických pro rod Lactobacillus LblMa-1 a R-16. PCR produkty (250 bp) byly detekovány pomocí agarozové gelové elektroforézy na 1,8% agarozovém gelu

Type

J_x - Unclassified - Peer-reviewed scientific article (Jimp, Jsc and Jost)

CEP classification

EB - Genetics and molecular biology

OECD FORD branch

—

Project

<a href="/en/project/2B08070" target="_blank" >2B08070: Development of new modern biotechnological process for more effective utilization of waste water from dairy industry as material source for hydrogen production.</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2008

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Chemické listy

ISSN

1213-7103

e-ISSN

—

Volume of the periodical

102

Issue of the periodical within the volume

15

Country of publishing house

CZ - CZECH REPUBLIC

Number of pages

2

Pages from-to

—

UT code for WoS article

—

EID of the result in the Scopus database

—