Comparison of Two Immunoanalytical Methods for Determination of Antibodies to Tick-Borne Encephalitis Virus

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60461373%3A22310%2F20%3A43921009" target="_blank" >RIV/60461373:22310/20:43921009 - isvavai.cz</a>

Alternative codes found

RIV/00216208:11310/20:10418227

Result on the web

<a href="http://www.chemicke-listy.cz/ojs3/index.php/chemicke-listy/article/view/3694/3627" target="_blank" >http://www.chemicke-listy.cz/ojs3/index.php/chemicke-listy/article/view/3694/3627</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

POROVNÁNÍ DVOU IMUNOANALYTICKÝCH METOD PRO STANOVENÍ PROTILÁTEK PROTI VIRU KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY

Original language description

Imunoanalytické metody hrají důležitou roli při detekci protilátek proti různým virovým patogenům v klinických a biologických vzorcích1–3 . Nejběžnějším dostupným analytickým a biochemickým způsobem detekce protilátek je enzymová imunoanalýza (ELISA, z angl. enzymelinked immunosorbent assay), při které se enzymy používají jako značky pro detekci cílových molekul, jež v roztoku se substrátem poskytují měřitelný signál4,5, nejčastěji spektrofotometrický. Nevýhodu použití enzymů je pokles jejich enzymatické aktivity s časem (na 70 až 50 %). Kromě toho musí být enzymy skladovány pouze při nízkých teplotách nebo v konzervačních roztocích, což vyžaduje pravidelné kontrolování jejich účinnosti a častou a rutinní validaci testovacích systémů ELISA (cit.6 ). Z výše uvedených důvodů roste v posledních desetiletích zájem o vývoj elektrochemických imunosenzorů, především vzhledem k jejich vysoké citlivosti, relativně nízkým pořizovacím a provozním nákladům a možnostem jejich miniaturizace7–11. Elektrochemické imunosenzory měří intenzitu elektrického signálu, který přímo či nepřímo poskytují produkty interakcí mezi protilátkou a antigenem, a tím kombinují specificitu imunochemické reakce s výhodami elektrochemické detekce. V závislosti na zvolené detekční technice se pak měří elektrická vodivost, elektrický proud, elektrodový potenciál, elektrická kapacita nebo elektrická impedance12,13 . Nejčastěji využívané elektrochemické imunosenzory jsou založeny na kovových nanočásticích (např. zlatých, stříbrných, měděných) použitých jako značky pro elektrochemickou detekci cílových biomolekul14–16 . Ve většině publikací zaměřených na elektrochemickou detekci biomolekul byly použity stříbrné nanočástice (AgNP, z angl. silver nanoparticle)15–17 vzhledem k celé řadě výhod, od snadné přípravy přes dobře prostudované vlastnosti až po znalost jejich chování při těchto stanoveních. Proto i v našem případě byly vybrány AgNP právě vzhledem k jejich relativně jednoduché přípravě a jasně definovanému voltametrickému signálu poskytovanému ionty stříbra uvolněnými z AgNP. Tato práce je zaměřena na stanovení protilátek proti viru klíšťové encefalitidy (KE), který je původcem lidské virové infekce centrálního nervového systému (CNS) v endemických oblastech Evropy a Asie18. Nejčastěji se tato nemoc projevuje horečkou, bolestí hlavy a záchvaty. Dalšími projevy mohou být fokální neurologický deficit a kóma19. Je proto nutné onemocnění diagnostikovat co nejdříve, aby se včas zahájila léčba. Infekce virem KE způsobuje imunitní reakci buněk lidského těla, a v důsledku toho začíná produkce protilátek proti KE20, což lze využít ke včasné diagnóze tohoto onemocnění. Cílem této práce bylo testování a porovnání dvou imunoanalytických metod – enzymové imunoanalýzy (ELISA) a voltametrické imunoanalýzy – pro detekci protilátek proti viru KE v modelových vodných prostředích a aplikace získaných poznatků na stanovení protilátek proti viru KE v lidském krevním séru.

Czech name

POROVNÁNÍ DVOU IMUNOANALYTICKÝCH METOD PRO STANOVENÍ PROTILÁTEK PROTI VIRU KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY

Czech description

Imunoanalytické metody hrají důležitou roli při detekci protilátek proti různým virovým patogenům v klinických a biologických vzorcích1–3 . Nejběžnějším dostupným analytickým a biochemickým způsobem detekce protilátek je enzymová imunoanalýza (ELISA, z angl. enzymelinked immunosorbent assay), při které se enzymy používají jako značky pro detekci cílových molekul, jež v roztoku se substrátem poskytují měřitelný signál4,5, nejčastěji spektrofotometrický. Nevýhodu použití enzymů je pokles jejich enzymatické aktivity s časem (na 70 až 50 %). Kromě toho musí být enzymy skladovány pouze při nízkých teplotách nebo v konzervačních roztocích, což vyžaduje pravidelné kontrolování jejich účinnosti a častou a rutinní validaci testovacích systémů ELISA (cit.6 ). Z výše uvedených důvodů roste v posledních desetiletích zájem o vývoj elektrochemických imunosenzorů, především vzhledem k jejich vysoké citlivosti, relativně nízkým pořizovacím a provozním nákladům a možnostem jejich miniaturizace7–11. Elektrochemické imunosenzory měří intenzitu elektrického signálu, který přímo či nepřímo poskytují produkty interakcí mezi protilátkou a antigenem, a tím kombinují specificitu imunochemické reakce s výhodami elektrochemické detekce. V závislosti na zvolené detekční technice se pak měří elektrická vodivost, elektrický proud, elektrodový potenciál, elektrická kapacita nebo elektrická impedance12,13 . Nejčastěji využívané elektrochemické imunosenzory jsou založeny na kovových nanočásticích (např. zlatých, stříbrných, měděných) použitých jako značky pro elektrochemickou detekci cílových biomolekul14–16 . Ve většině publikací zaměřených na elektrochemickou detekci biomolekul byly použity stříbrné nanočástice (AgNP, z angl. silver nanoparticle)15–17 vzhledem k celé řadě výhod, od snadné přípravy přes dobře prostudované vlastnosti až po znalost jejich chování při těchto stanoveních. Proto i v našem případě byly vybrány AgNP právě vzhledem k jejich relativně jednoduché přípravě a jasně definovanému voltametrickému signálu poskytovanému ionty stříbra uvolněnými z AgNP. Tato práce je zaměřena na stanovení protilátek proti viru klíšťové encefalitidy (KE), který je původcem lidské virové infekce centrálního nervového systému (CNS) v endemických oblastech Evropy a Asie18. Nejčastěji se tato nemoc projevuje horečkou, bolestí hlavy a záchvaty. Dalšími projevy mohou být fokální neurologický deficit a kóma19. Je proto nutné onemocnění diagnostikovat co nejdříve, aby se včas zahájila léčba. Infekce virem KE způsobuje imunitní reakci buněk lidského těla, a v důsledku toho začíná produkce protilátek proti KE20, což lze využít ke včasné diagnóze tohoto onemocnění. Cílem této práce bylo testování a porovnání dvou imunoanalytických metod – enzymové imunoanalýzy (ELISA) a voltametrické imunoanalýzy – pro detekci protilátek proti viru KE v modelových vodných prostředích a aplikace získaných poznatků na stanovení protilátek proti viru KE v lidském krevním séru.

Type

J_imp - Article in a specialist periodical, which is included in the Web of Science database

CEP classification

—

OECD FORD branch

10406 - Analytical chemistry

Project

<a href="/en/project/GC20-01417J" target="_blank" >GC20-01417J: New approaches preventing passivation in monitoring of environmental organic pollutants</a><br>

Continuities

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Publication year

2020

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Name of the periodical

Chemické listy

ISSN

0009-2770

e-ISSN

—

Volume of the periodical

114

Issue of the periodical within the volume

9

Country of publishing house

CZ - CZECH REPUBLIC

Number of pages

5

Pages from-to

618-622

UT code for WoS article

000567994200009

EID of the result in the Scopus database

2-s2.0-85090773664