Determination of viable probiotic lactobacilli using qPCR with Propidium Monoazide

Result code in IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60461373%3A22330%2F16%3A43901984" target="_blank" >RIV/60461373:22330/16:43901984 - isvavai.cz</a>

Result on the web

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Result language

čeština

Original language name

Stanovení živatoschopných probiotických laktobacilů pomocí qPCR s využitím propidium monoazidu.

Original language description

Probiotika jsou živé mikroorganismy, které při podání v adekvátním množství přináší hostiteli zdravotní výhody (FAO/WHO, 2002). Pro splnění této definice je třeba, aby výrobek obsahoval alespoň 106 až 109 KTJ BULLET OPERATOR g -1 životaschopných probiotických mikroorganismů. Z tohoto důvodu je nutné mít ověřené metody selektivního stanovení probiotických bakterií. Stanovení pomocí plotnových metod je ve směsi s ostatními bakteriemi mléčného kvašení problematické z důvodu velké fenotypické podobnosti. Jako možné řešení se nabízí kvantitativní polymerázová řetězová reakce (qPCR) s využitím propidium monoazidu pro stanovení pouze živých buněk. Cílem ráce bylo optimalizovat metodu pro stanovení pouze životaschopných laktobacilů za použití propidium monoazidu v kombinaci s qPCR (PMA-qPCR). Byly hodnoceny podmínky metody jako je výběr barviva, koncentrace barviva, přídavek cholátu sodného a doba fotoindukce. Daná metoda PMA-qPCR byla porovnána s plotnovými metodami a qPCR bez použití propidium monoazidu. Pro Lactobacillus casei a Lactobacillus acidophilus byl jako vhodné barvivo vybrán propidium monoazid o konečné koncentraci 50 mmol BULLET OPERATOR l-1, s přídavkem 0,5 % hm. cholátu sodného a dobou fotoindukce pomocí LED lampy 15 minut. Výsledky získané pomocí této metody byly specifičtější než pomocí qPCR.

Czech name

Stanovení živatoschopných probiotických laktobacilů pomocí qPCR s využitím propidium monoazidu.

Czech description

Probiotika jsou živé mikroorganismy, které při podání v adekvátním množství přináší hostiteli zdravotní výhody (FAO/WHO, 2002). Pro splnění této definice je třeba, aby výrobek obsahoval alespoň 106 až 109 KTJ BULLET OPERATOR g -1 životaschopných probiotických mikroorganismů. Z tohoto důvodu je nutné mít ověřené metody selektivního stanovení probiotických bakterií. Stanovení pomocí plotnových metod je ve směsi s ostatními bakteriemi mléčného kvašení problematické z důvodu velké fenotypické podobnosti. Jako možné řešení se nabízí kvantitativní polymerázová řetězová reakce (qPCR) s využitím propidium monoazidu pro stanovení pouze živých buněk. Cílem ráce bylo optimalizovat metodu pro stanovení pouze životaschopných laktobacilů za použití propidium monoazidu v kombinaci s qPCR (PMA-qPCR). Byly hodnoceny podmínky metody jako je výběr barviva, koncentrace barviva, přídavek cholátu sodného a doba fotoindukce. Daná metoda PMA-qPCR byla porovnána s plotnovými metodami a qPCR bez použití propidium monoazidu. Pro Lactobacillus casei a Lactobacillus acidophilus byl jako vhodné barvivo vybrán propidium monoazid o konečné koncentraci 50 mmol BULLET OPERATOR l-1, s přídavkem 0,5 % hm. cholátu sodného a dobou fotoindukce pomocí LED lampy 15 minut. Výsledky získané pomocí této metody byly specifičtější než pomocí qPCR.

Type

D - Article in proceedings

CEP classification

GM - Food industry

OECD FORD branch

—

Project

—

Continuities

S - Specificky vyzkum na vysokych skolach

Publication year

2016

Confidentiality

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Article name in the collection

Sborník Celostátní přehlídky sýrů 2016

ISBN

978-80-7080-973-0

ISSN

—

e-ISSN

—

Number of pages

7

Pages from-to

129-135

Publisher name

Vysoká škola chemicko-technologická v Praze

Place of publication

Praha

Event location

Praha

Event date

Jan 19, 2016

Type of event by nationality

EUR - Evropská akce

UT code for WoS article

—