Měření pH v modelových systémech liposomů pomocí fluorescenčních sond metodami stacionární a časově rozlišené fluorescence
Cíle projektu
Cílem tohoto projektu je vyvinutí nových metod měření pH v suspenzích liposomů pomocí fluorescenčních sond a jejich využití při studiu činnosti protonové pumpy kvasinek zabudované v membráně liposomů. Aplikace stacionární a časově-rozlišené fluorescencepři studiu prázdných a proteinem plněných liposomů obarvených fluorescenční značkou by měla přispět k objasnění změn spektrálních a kinetických parametrů fluorescenčních sond při přechodu od roztoků pufrů k buňce. Studium suspenzí liposomů s pH nastavenýpomocí nigericinu by mohlo dát odpověď na otázku, proč se liší hodnoty pH velkých buněk změřené pomocí fluorescenčních sond od hodnot získaných přímým měřením využívajícím elektrod. Současně se dá očekávat zpřesnění kalibračních metod měřením změn dob života fluorescence použitých fluorescenčních sond, neboť v současnosti se při studiu živých buněk využívá téměř výhradně metod stacionární fluorescence založených na měření posuvů excsitačních nebo emisních spekter pH-citlivých barviv zavedených do cyto
Klíčová slova
Veřejná podpora
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
Program
Standardní projekty
Veřejná soutěž
—
Hlavní účastníci
Univerzita Karlova / Matematicko-fyzikální fakulta
Druh soutěže
VS - Veřejná soutěž
Číslo smlouvy
—
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
Measurement of pH in model systems of liposomes by means of fluorescent probes using steady-state and time-resolved fluorescence techniques
Anotace anglicky
The main goal of this project is to develop new techniques for pH measurements in liposomes by means of fluorescent probes, including their application to the study of the proton pump of yeast in the proteoliposomes. Steady-state and time-resolved fluorescence studies in both pure and protein-loaded liposomes stained by selected fluorescent dyes will provide better insight into probe response variations due to the changes of the cell medium, occuring when going from buffer solutions to the cell environment. The investigation of liposomal suspensions with pH manipulated using nigericin could help to explain the question why there is a difference in values of pH measured in large cells by fluorescent probes as compared to those obtained directlywith microelectrodes. Moreover, with fluorescence lifetime measurements further improvement of the pH calibration protocol can be expected, as compared to the standard steady-state fluorescence techniques based on measurements of spectral shifts of exci
Vědní obory
Kategorie VaV
—
CEP - hlavní obor
BG - Jaderná, atomová a molekulová fyzika, urychlovače
CEP - vedlejší obor
ED - Fyziologie
CEP - další vedlejší obor
EE - Mikrobiologie, virologie
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10304 - Nuclear physics
10606 - Microbiology
10607 - Virology
30105 - Physiology (including cytology)
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
Byla vypracována metoda rutinního měření pH v liposomech v oblasti pH 6-8 pomocí fluorescenční sondy pyranin. Tato metoda umožňuje rovněž měření propustnosti membrány liposomů pro protony. Dále byla vypracována metoda přípravy proteoliposomů se zabudovan
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 1999
Ukončení řešení
1. 1. 2001
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
—
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP/2002/GA0/GA02GA/U/N/7:3
Datum dodání záznamu
1. 4. 2003
Finance
Celkové uznané náklady
2 262 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
1 982 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
760 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Základní informace
Uznané náklady
2 262 tis. Kč
Statní podpora
1 982 tis. Kč
87%
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
CEP
BG - Jaderná, atomová a molekulová fyzika, urychlovače
Doba řešení
01. 01. 1999 - 01. 01. 2001