Mapování membránového potenciálu, pH, vápníku a dalších iontů u živočišných a rostlinných buněk pomocí fluorescenčních sond a konfokálního mikroskopu
Cíle projektu
Transport látek přes membránu a transdukce signálu přes membránu je aázána na lokální změny pH, vápníku, membránového potenciálu, dalších iontů, cytoskeletonu. Novinkou jsou elektrochromní fluorescenční sondy typu ANEPPS, které reagují změnou emisních aexcitačních spekter na velikost elektrického pole. Po jejím zabudování do buněčné membrány lze ve spojení s fluorescenčním mikroskopem mapovat velikost membránového potenciálu a provádět in vivo individuální měření membránového potenciálu jednotlivých buněk. V naší laboratoři bylo již prokázáno, že v suspensi buněk kvasinek, tkáňové kultuře lymfocytů a rostlinných pletiv se vnitrobuněčné pH cytoplasmy buňku od buňky liší. Očekáváme proto i podobné individuální rozdíly v hodnotách membránového potenciálu. Vzhledem k tomu, že spektrální vlastnosti sondy ANEPPS dovolují současné měření membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH, resp. vápníku bude tak možnost současně sledovat změny membránového potenciálu, pH a pCa po podráždění buněk přidání
Klíčová slova
Veřejná podpora
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
Program
Standardní projekty
Veřejná soutěž
—
Hlavní účastníci
Fyziologický ústav AV ČR, v. v. i.
Druh soutěže
—
Číslo smlouvy
—
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
Mapping of membrane potential, pH, calcium and other ions in animal and plant cells using fluorescent probes and confocal microscopy
Anotace anglicky
The transport accross the membrane as well as the transduction of the signal accross the membrane is related to the local changes in pH, calcium, membrane potential, other ions, cytoskeleton. The novelty is the electrochromic fluorescent probe ANEPPS which changes its emission and excitation fluorescence spectra according the magnitude of the electric field. After incorporation into the cell membrane it can, in connection with fluorescence microscopy, give in vivo maps of membrane potential and invidualmembrane potential values of cells. We have shown in our laboratory, that there are individual differences in cotyplasmic pH among cells in suspension of yeast cells, cell culture of lymphocytes and in plant tissues. Similar individual differences in membrane potential a presumed. The spectral properties of ANEPPS alow to use simultaneously several dyes and thus allow simultaneous measurement of membrane potential, intracellular pH and calcium (both in a confocal as well as in a clasic
Vědní obory
Kategorie VaV
—
CEP - hlavní obor
ED - Fyziologie
CEP - vedlejší obor
EE - Mikrobiologie, virologie
CEP - další vedlejší obor
EA - Morfologické obory a cytologie
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10601 - Cell biology
10602 - Biology (theoretical, mathematical, thermal, cryobiology, biological rhythm), Evolutionary biology
10606 - Microbiology
10607 - Virology
30105 - Physiology (including cytology)
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
Přes tragické okolnosti (úmrtí řešitele) se podařilo základní cíle projektu splnit. Výsledky přispívají k prohloubení využití neinvazivních metod pro měření důležitých buněčných parametrů (pH, Ca) u rostlin a kvasinek. Zvláštní pozornost byla věnována re
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 1998
Ukončení řešení
1. 1. 2000
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
—
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP/2001/GA0/GA01GA/U/N/9:4
Datum dodání záznamu
—
Finance
Celkové uznané náklady
607 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
607 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
0 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Základní informace
Uznané náklady
607 tis. Kč
Statní podpora
607 tis. Kč
100%
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
CEP
ED - Fyziologie
Doba řešení
01. 01. 1998 - 01. 01. 2000