Mechanizmus aktivace proteáz sekretovaných patogenní kvasinkou Candida parapsilosis
Cíle projektu
Candida parapsilosis je oportunistický patogen. Virulenční faktory nebyly u C. parapsilosis zkoumány tak podrobně jako u C. albicans. Předpokládá se, že i u C. parapsilosis se na virulenci podílejí sekretované aspartátové proteázy (Sap). U C. parapsilosis byly nalezeny 3 geny kódující Sap. Na proteinové úrovni byl dosud popsán pouze isoenzym Sapp1p. O jeho aktivaci však není nic známo. Cílem projektu je charakterizace produktu genu SAPP2 a především objasnění mechanismu aktivace proteáz Sapp1p a Sapp2p.Budou připraveny rekombinantní prekursory obou isoenzymů. Bude zjištěno, zda ke konverzi dochází autokatalyticky, nebo vlivem jiných proteáz. Aktivované rekombinantní proteázy budou porovnány a autentickými enzymy izolovanými z kultury C. parapsilosis.Pomocí isoelektrické fokusace, western blotů a RT-PCR bude zjištěno, za jakých podmínek jsou jednotlivé Sap kvasinkou exprimovány. Geny SAPP1 a SAPP2 v C. parapsilosis budou deletovány, za účelem objasnění role enzymů Sapp1p a Sapp2p.
Klíčová slova
aspartic proteinaseproteinase activationprecursor processingpropeptideCandida parapsilosis
Veřejná podpora
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
Program
Standardní projekty
Veřejná soutěž
Standardní projekty 8 (SGA02005GA-ST)
Hlavní účastníci
—
Druh soutěže
VS - Veřejná soutěž
Číslo smlouvy
203/05/0038
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
Mechanism of activation of the proteinases secreted by the pathogenic yeast Candida parapsilosis
Anotace anglicky
Candida parapsilosis is an opportunistic pathogen. Its virulence factors have not been studied so thoroughly as those of C. albicans. Secreted aspartic proteinases (Sap) are believed to play a role in virulence of C. parapsilosis. 3 SAP genes were foundin this fungus. Only the Sapp1p isoenzyme was studied on a protein level but nothing is known about its activation. The aim of this project is to characterize a SAPP2 gene product, and in particular, to elucidate the activation mechanisms of proteinasesSapp1p and Sapp2p. Recombinant precursors of both isoenzymes will be prepared. It will be examined whether the activation proceeds autocatalytically, or if it is mediated by another proteinase. The activated recombinant proteinases will be compared withauthentic enzymes isolated from C. parapsilosis culture. Conditions under which the individual Saps are expressed by yeast will be examined using isoelectric focusing, western blotting and RT-PCR. The SAPP1 and SAPP2 genes will be disrupted in order to
Vědní obory
Kategorie VaV
ZV - Základní výzkum
CEP - hlavní obor
CE - Biochemie
CEP - vedlejší obor
—
CEP - další vedlejší obor
—
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
V průběhu řešení tohoto projektu se nám podařilo ukázat, že aspartátové proteázy, které sekretuje C. parapsilosis, jsou regulovány diferenčně, a to na více úrovních. Zatímco transkripce genu SAPP1 je inducibilní, geny SAPP2 a SAPP3 jsou pravděpodobně tra
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 2005
Ukončení řešení
31. 12. 2007
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
2. 5. 2007
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP08-GA0-GA-U/04:3
Datum dodání záznamu
16. 12. 2008
Finance
Celkové uznané náklady
1 407 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
1 407 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
0 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Základní informace
Uznané náklady
1 407 tis. Kč
Statní podpora
1 407 tis. Kč
100%
Poskytovatel
Grantová agentura České republiky
CEP
CE - Biochemie
Doba řešení
01. 01. 2005 - 31. 12. 2007