Konformační přechody v plasmidové DNA
Cíle projektu
DNA vykazuje konformační přechody, které výrazně mění její biofyzikální a molekulárně biologické vlastnosti. Nejčastěji používanou metodou ke studiu konformačních přechodů v DNA je CD spektroskopie. Ta ale není vhodná pro mapování konformačních přechodůpodél dlouhých úseků genomové DNA, protože poskytuje integrální obraz o chování celé molekuly. V tomto projektu chceme vyvinout dvě komplementární metody založené na skutečnosti, že poškození vyvolané na DNA UV světlem závisí na konformaci DNA. K detekcifotoproduktů využijeme metodu primer extension, která dává informace s nukleotidovým rozlišením, ale jen v úsecích o délce stovek nukleotidů. K detekci konformačních přechodů podél kilobázových molekul DNA využijeme skutečnost, že poškození DNA blokujejejí štěpení restriktázami. Tyto metody využijeme ke studiu konformačních přechodů v molekule plasmidu pUC19. Přednostně se zaměříme na přechor B-A a na přechody indukované negativním a pozitivním nadšroubovicovým vinutím.
Klíčová slova
conformational transitionsUV lightplasmid DNAsupercoilingphotoproductsprimer extensionrestrictasesCD spectroscopy
Veřejná podpora
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
Program
Granty výrazně badatelského charakteru zaměřené na oblast výzkumu rozvíjeného v současné době zejména v AV ČR
Veřejná soutěž
Výzkumné granty 3 (SAV02003-A)
Hlavní účastníci
Biofyzikální ústav AV ČR, v. v. i.
Druh soutěže
VS - Veřejná soutěž
Číslo smlouvy
—
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
Conformational Transitions in Plasmid DNA
Anotace anglicky
DNA undergoes conformational transitions which substantially change its biophysical and molecular biological properties. The mostly used method of research into DNA conformational transitions is CD spectroscopy, Which nevertheless is not suitable for mapping the transitions along segments of genomic DNA, as it provides a picture of the whole molecule behaviour. In this project we intend to develop two complementary methods based on the fact that UV-induced DNA damage is DNA conformation dependent. We will detect photoproducts via primer extension method, which gives information at single nucleotide resolution, but in segments of hundreds nucleotides only. To detect the transitions along kilobase DNA molecules, the fact that damaged DNA inhibits restrictases cleavage will be used. These methods will be applied to the research into the conformational in plasmid pUC19-preferentially for B-A transition and for negative and positive superhelicity induced transitions.
Vědní obory
Kategorie VaV
ZV - Základní výzkum
CEP - hlavní obor
BO - Biofyzika
CEP - vedlejší obor
EB - Genetika a molekulární biologie
CEP - další vedlejší obor
CE - Biochemie
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
10610 - Biophysics
30101 - Human genetics
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
Byla vyvinuta dvojice komplementárních metod, detegujících poškození, které v DNA generuje ultrafialové světlo. Tyto metody byly využity ke studiu konformačních přechodů v plasmidové DNA a odvozeném fragmentu a jejich ovlivnění nadšroubovicovým vinutím.
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 2003
Ukončení řešení
1. 1. 2005
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
—
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP06-AV0-IA-U/04:2
Datum dodání záznamu
26. 9. 2007
Finance
Celkové uznané náklady
1 284 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
751 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
0 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Základní informace
Uznané náklady
1 284 tis. Kč
Statní podpora
751 tis. Kč
58%
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
CEP
BO - Biofyzika
Doba řešení
01. 01. 2003 - 01. 01. 2005