Manipulace s mitochondriální DNA za účelem simulace oxidačního stresu
Cíle projektu
Projekt vyvine metody importu nukleových kyselin do matrix mitochondrií živých buněk, jako HEPG2, HeLa, či INS1E buněk, (s využitím DNA-polyetyleniminových konjugátů s mitochondriální adresující sekvencí - MAP); TPP-konjugáty protein-nukleových kyselin (TPP-PNA), či TPP-MAP-PNA; s využitím DQAsomů ? tj. kladně nabitých liposomů fúzujících s mitochondriemi; či s využitím telomerázy reverzní transkriptázy (TERT) v komplexech s nukleovými kyselinami; ii) aplikuje a rozvine zavedené metody pro vývoj silencování exprese genu ND5 mitochondriální DNA jako prototypického příkladu, s využitím matrixového importu antisense-RNA-podobné PNA a později také silencování s vysokou specificitou, zvýšením selektivity tak, že budou rozeznávány jednobodové mutace; a dáleiii) budeme studovat důsledky takového silencování exprese genu ND5, zejména očekávaný oxidační stres (stanoveními matrixově vylévaného superoxidu in vivo) ve vztahu k mitopatiím a nemocem s původem v oxidačním stresu.
Klíčová slova
Veřejná podpora
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
Program
Juniorské badatelské grantové projekty
Veřejná soutěž
Juniorské badatelské grantové projekty 7 (SAV02009-B)
Hlavní účastníci
—
Druh soutěže
VS - Veřejná soutěž
Číslo smlouvy
KJB500110902
Alternativní jazyk
Název projektu anglicky
Mitochondrial DNA manipulations for simulation of oxidative stress
Anotace anglicky
The project will i) develop methods for nucleic acid import into the mitochondrial matrix of living cells such as HEPG2, HeLa, or INS1E cells, (using DNA-polyethylenimine conjugates with the mitochondrial addressing peptide (MAP) sequence; TPP-conjugatedprotein nucleic acids (TPP-PNA), or TPP-MAP-PNA; DQAsomes ? i.e. positive charged lipid liposomes fusing with mitochondria; or telomerase reverse transcriptase (TERT) - nucleic acid complexes), ii) exercise and improve the developed methods for achievement of silencing expression of the ND5 gene of mitochondrial DNA as a prototypical gene, using e.g. matrix delivery of antisense-RNA-like PNA and later high-fidelity silencing to enhance the selectivity that it will discriminate between single base mutations; and iii) access consequences of ND5 expression silencing, namely to assay the expected oxidative stress (assaying matrix released superoxide in vivo) in relation to mitopathies and oxidative-stress-related diseases.
Vědní obory
Kategorie VaV
ZV - Základní výzkum
CEP - hlavní obor
ED - Fyziologie
CEP - vedlejší obor
EB - Genetika a molekulární biologie
CEP - další vedlejší obor
BO - Biofyzika
OECD FORD - odpovídající obory
(dle převodníku)10603 - Genetics and heredity (medical genetics to be 3)
10604 - Reproductive biology (medical aspects to be 3)
10605 - Developmental biology
10608 - Biochemistry and molecular biology
10609 - Biochemical research methods
10610 - Biophysics
30101 - Human genetics
30105 - Physiology (including cytology)
Hodnocení dokončeného projektu
Hodnocení poskytovatelem
U - Uspěl podle zadání (s publikovanými či patentovanými výsledky atd.)
Zhodnocení výsledků projektu
Byly zavedeny a otestovány metodiky fluorescenční in situ hybridizace nukleových kyselin mitochondriální DNA a jí příslušných RNA i dvě metodiky importu fluorescenčních i nefluorescenčních nukleových kyselin do mitochondriální matrix buněk in vivo.
Termíny řešení
Zahájení řešení
1. 1. 2009
Ukončení řešení
31. 12. 2011
Poslední stav řešení
U - Ukončený projekt
Poslední uvolnění podpory
18. 3. 2011
Dodání dat do CEP
Důvěrnost údajů
S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů
Systémové označení dodávky dat
CEP12-AV0-KJ-U/01:1
Datum dodání záznamu
25. 5. 2012
Finance
Celkové uznané náklady
1 797 tis. Kč
Výše podpory ze státního rozpočtu
1 797 tis. Kč
Ostatní veřejné zdroje financování
0 tis. Kč
Neveřejné tuz. a zahr. zdroje finan.
0 tis. Kč
Uznané náklady
1 797 tis. Kč
Statní podpora
1 797 tis. Kč
0%
Poskytovatel
Akademie věd České republiky
CEP
ED - Fyziologie
Doba řešení
01. 01. 2009 - 31. 12. 2011