Výroba setu ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u gramnegativních bakterií – I. řada

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F17%3AN0000168" target="_blank" >RIV/00027162:_____/17:N0000168 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

<a href="https://www.vri.cz/userfiles/file/Overene_technologie/2017/VUVeL-Overena_technologie-4783-Nedbalcova-Vyr_setu_ke_stanov_minimal_inhib_koncentr_antimikrob_latek_u_gramnegativ_bakt-I.rada.pdf" target="_blank" >https://www.vri.cz/userfiles/file/Overene_technologie/2017/VUVeL-Overena_technologie-4783-Nedbalcova-Vyr_setu_ke_stanov_minimal_inhib_koncentr_antimikrob_latek_u_gramnegativ_bakt-I.rada.pdf</a>

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Výroba setu ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u gramnegativních bakterií – I. řada

Popis výsledku v původním jazyce

Ověřená technologie popisuje detailně výrobu, kontrolu kvality a způsob použití setu ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antibiotik u gramnegativních bakterií. Umožňuje laboratorní in vitro stanovení citlivosti/rezistence klinických izolátů – humánních patogenů - gramnegativních bakterií především rodů Enterobacteriaceae spp. a Haemophilus spp.na základě stanovení minimálních inhibičních koncentrací (MIC) mikrodiluční metodou ke 12 antibiotikům (ampicilin, ampicilin v kombinaci se sulbaktamem, cefazolin, cefuroxim, cefoxitin, chloramfenikol, tetracyklin, gentamicin, trimethoprim v kominaci se sulamethoxazolem, kostin, ofloxacin, aztreonam). Jedná se o mikrotitrační destičku s 96 jamkami - 12 sloupců (1-12) a 8 řádků (A-H). Ve sloupcích je v růstovém médiu naředěno dvanáct antibiotik používaných k léčbě infekcí lidí způsobených enterobakteriemi nebo hemofily v objemu 100 µl, u jedenácti antibiotik (sloupce 1-11) je na destičce 8 ředění (řádky A-H) a u jednoho antibiotika (sloupec 12) je 7 ředění (řádky B-H) a v řádku A je jamka s 200 µl média bez antibiotika sloužící jako pozitivní kontrola růstu testovaných bakterií. Počáteční koncentrace jednotlivých antibiotik na destičce jsou rozdílné a jsou voleny tak, aby hodnoty MIC vyšetřovaných bakterií zahrnovaly rozmezí breakpointů citlivosti/rezistence podle závazných mezinárodních metodik Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) a European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) rozmezí hodnot MIC bakteriálních kmenů povinně testovaných v rámci kontroly kvality, které je pro jednotlivá antibiotika rozdílné. Pro enterobakterie je použito růstové médium CAMHB – kation adjusted Mueller-Hinton Broth a pro hemofily CAMHB s přídavkem 5 % lyzované koňské krve (CLSI, EUCAST). Ze zásobních koncentrací antimikrobiálních látek 10 000 mg/L se připravují pracovní koncentrace antimikrobik 1 000 mg/L (K 1 000), 10 mg/L (K 10) nebo 1 mg/L (K 1) ředěním ve sterilní destilované vodě, ze které se připraví finální koncentrace antimikrobik v objemu 25 ml do 96 velkých zkumavek. Finální koncentrace antimikrobik se připravují ředěním v růstovém médiu a jsou aplikovány do příslušných jamek na destičce v objemu 0,1 ml. Plnění jednotlivých jamek destiček z velkých zkumavek je prováděno laboratorním rozplňovacím přístrojem DYNATECH Laboratories 1036 Quick spenze IIE dle návodu výrobce. Rozplněné desky opatřené víčkem jsou baleny po 5 kusech do smrštitelné fólie a uloženy v -80 °C. Veškeré práce na přípravě a výrobě MIC setů (příprava roztoků antibiotik a jejich aplikace na destičky) probíhají v prostorách se zajištěnou filtrací vzduchu (třída čistoty A). Kontrola kvality výroby se provádí stanovením MIC antimikrobiálních látek u referenčních kmenů Escherichia coli ATCC 25922 a Haemophilus influenzae ATCC 49247 a provedením zkoušky sterility bezprostředně po výrobě a dále u jednotlivých šarží v týdenních intervalech až do exspirace výrobku – 6 měsíců ode dne výroby.

Název v anglickém jazyce

Production process of the set to determine minimum inhibitory concentrations of antimicrobials in gramnegative bacteria – 1st series

Popis výsledku anglicky

Verified technology describes in detail the production, quality control, and method of using the kit to determine the minimum inhibitory concentrations of antibiotics in gram-negative bacteria. Allows laboratory in vitro sensitivity / resistance assessment of clinical isolates - human pathogens - gram-negative bacteria, especially Enterobacteriaceae spp. and Haemophilus spp. based on the determination of minimum inhibitory concentrations (MIC) by microdilution method to 12 antibiotics (ampicillin, ampicillin in combination with sulbactam, cefazolin, cefuroxime, cefoxitin, chloramphenicol, tetracycline, gentamicin, trimethoprim in combination with sulamethoxazole, ). It is a 96-well microtiter plate - 12 columns (1-12) and 8 rows (A-H). Twelve antibiotics used for the treatment of human infections caused by Enterobacteriaceae spp. and Haemophilus spp. in a volume of 100 μl are diluted in the growth medium, eleven antibiotics (columns 1-11) are on the plate 8 dilutions (lines AH) and one antibiotic (column 12) is 7 dilution (BH lines), and line A is a well with 200 μl antibiotic-free media serving as a positive control of the growth of the test bacteria. The initial concentrations of individual antibiotics on the plate are different and are chosen such that the MIC values of the investigated bacteria include a range of sensitivity / resistance breakpoints according to the binding international methodologies of the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) and the European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) range of MIC values of bacterial strains which are compulsorily tested for quality control, which is different for each antibiotic. For enterobacteria, CAMHB-cation adjusted Mueller-Hinton Broth growth medium and CAMHB with 5% lysed horse blood (CLSI, EUCAST) for Haemophilus spp. were used. From 10,000 mg / L antimicrobial stock concentrations, antimicrobial concentrations of 1000 mg / L (K 1000), 10 mg / L (K 10) or 1 mg / L (K 1) are prepared by dilution in sterile distilled water, which produces the final 25 ml antimicrobial concentration in 96 large tubes. Final concentrations of the antimicrobial are prepared by dilution in the growth medium and applied to the respective wells on a 0.1 ml plate. Filling of individual wells in large tubes is performed with the DYNATECH Laboratories 1036 Quick Spray IIE laboratory according to the manufacturer's instructions. Filled cap plates are packed in 5 shrink-wrapped foil and stored at -80 ° C. All work on the preparation and manufacture of MIC sets (preparation of antibiotic solutions and their application on plates) takes place in rooms with air filtration (purity class A). Production quality control is performed by determining the antimicrobial MIC in the reference strains of Escherichia coli ATCC 25922 and Haemophilus influenzae ATCC 49247 and by performing the sterility test immediately after manufacture, followed by batches at weekly intervals until expiry of the product - 6 months from the date of manufacture.

Druh

Z_tech - Ověřená technologie

CEP obor

—

OECD FORD obor

30303 - Infectious Diseases

Projekt

<a href="/cs/project/TG03010038" target="_blank" >TG03010038: Rozvoj systému podpory "Proof-of-concept" na VÚVeL</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2017

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Interní identifikační kód produktu

OT - Set na stanovení MIC – G- I. řada

Číselná identifikace

ISBN 978-80-88233-16-9

Technické parametry

Funkčnost výrobku byla ověřena formou pravidelného týdenního testování a kontrolou kvality vybraných vyrobených šarží. Kontrola kvality byla prováděna testováním kontrolních kmenů Escherichia coli ATCC 25922 a Haemophilus influenzae ATCC 49247, které jsou přesně definovány a jejich hodnoty MIC k antimikrobiálním látkám jsou uvedeny v laboratorních standardech CLSI a EUCAST. Hodnoty MIC u jednotlivých antimikrobik musí být v rozmezí definovaných hodnot MIC dle CLSI a EUCAST. Z průběhu kontrol byl zpracován Protokol o ověření technologie, nezávislý ověřovatel – LabMediaServis s.r.o.

Ekonomické parametry

Ekonomické přínosy využívání výsledku lze rozdělit minimálně na dvě oblasti – zisk diagnostických laboratoří prováděním stanovení citlivosti/rezistence anaerobních bakterií k antibiotikům a ekonomický přínos pro chovatele hospodářských zvířat. Ekonomický přínos pro laboratoře bude představovat zisk z provedených vyšetření. Za předpokladu vyšetření v jedné laboratoři cca 500 vzorků ročně při ceně za jedno vyšetření kolem 500,- Kč, by se zisk 20 % z tržeb mohl pohybovat kolem 50 tis. pro jednu laboratoř. Dalším uživatelům výsledků vyšetření - chovatelům hospodářských zvířat se sníží zlepšením diagnostiky ekonomické náklady na léčbu a prevenci onemocnění a zvýší se tržby za prodej zdravotně nezávadných kvalitních potravin a surovin živočišného původu. Přesné vyčíslení přínosů chovatelům není možné, záleží vždy na zdravotní situaci a způsobu managementu v jednotlivých chovech.

Kategorie aplik. výsledku dle nákladů

—

IČO vlastníka výsledku

00027162

Název vlastníka

Výzkumný ústav veterinárního lékařství, v.v.i.

Stát vlastníka

CZ - Česká republika

Druh možnosti využití

N - Využití výsledku jiným subjektem je možné bez nabytí licence (výsledek není licencován)

Požadavek na licenční poplatek

—

Adresa www stránky s výsledkem

https://www.vri.cz/userfiles/file/Overene_technologie/2017/VUVeL-Overena_technologie-4783-Nedbalcova-Vyr_setu_ke_stanov_minimal_inhib_koncentr_antimikrob_latek_u_gramnegativ_bakt-I.rada.pdf