Optimalizace testu blastické transformace lymfocytů u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss)

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00027162%3A_____%2F19%3AN0000170" target="_blank" >RIV/00027162:_____/19:N0000170 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Optimalizace testu blastické transformace lymfocytů u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss)

Popis výsledku v původním jazyce

TOXCON 2019 (24th Interdisciplinary Toxicology Conference), Vyhne, Slovensko, 26. - 28. 6. 2019 – poster, abstrakt ve sborníku. Stav imunitního systému ryb může být posouzen funkčními imunologickými testy, které jsou často využívány i v toxikologických studiích. Během testu blastické transformace lymfocytů tyto buňky proliferují po stimulaci různými mitogeny a stávají se z nich lymfoblasty. Cílem této studie byla optimalizace této metody u pstruha duhového (Oncorhynchus mykiss). Vzorky zahrnovaly hlavovou ledvinu a periferní krev odebranou za použití různých antikoagulancií (heparin, EDTA). Mononukleární buňky byly izolovány centrifugací na denzitním gradientu. Izolované buňky byly inkubovány při 10–20°C s různými mitogeny (pokeweed mitogen 5, 10 a 50 µg.mL-1, konkanavalin A 1, 10 a 20 µg.mL-1, fytohemaglutinin 25, 50 a 100 µg.mL-1, lipopolysacharid 1, 50 a 100 µg.mL-1) a fetálním bovinním sérem nebo pstružím sérem. Po uplynutí inkubační doby (2–8 dnů) byl do buněčné suspenze přidán značený thymidin. Množství thymidinu inkorporovaného do nově vznikající DNA bylo následně změřeno přístrojem pro kapalnou scintilaci ve formě počtu záblesků za minutu (CPM). Nejvyšší hodnoty buněčné proliferace byly pozorovány u lymfocytů periferní krve (odebrané na heparin) po 7 dnech inkubace při 15 ° C s fetálním bovinním sérem. Nejlepší výsledky byly zaznamenány s fytohemaglutininem (100 µg.mL-1) u buněk hlavové ledviny a s pokeweed mitogenem (50 µg.mL-1) u buněk periferní krve (s nejvyššími hodnotami při použití heparinizované krve). Optimalizace tohoto testu rozšiřuje možnosti kvalitního posouzení stavu imunitního systému pstruha duhového.

Název v anglickém jazyce

Optimization of the lymphocyte proliferation assay in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

Popis výsledku anglicky

TOXCON 2019 (24th Interdisciplinary Toxicology Conference), Vyhne, Slovakia, 26. - 28. 6. 2019 – poster, abstract. The ability of the immune system to react to stimulants can be measured by functional immunological assays, which are often used in toxicological studies. During the lymphocyte proliferation assay, lymphocytes are stimulated by various mitogens, proliferate and transform into lymphoblasts. The aim of this study was to optimize the assay in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Samples included head kidney and peripheral blood collected using different anticoagulants (heparin, EDTA). Mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. The isolated cells were incubated at 10–20°C with mitogens (pokeweed mitogen 5, 10 and 50 µg.mL-1, concanavalin A 1, 10 and 20 µg.mL-1, phytohaemagglutinin 25, 50 and 100 µg.mL-1, lipopolysaccharide 1, 50 and 100 µg.mL-1) and foetal bovine or trout serum. After the incubation period (2–8 days), labelled thymidine was added to the cell suspension. The amount of thymidine incorporated into DNA was measured by a liquid scintillation counter in counts per minute (CPM). Best results were obtained after 7 days of incubation at 15°C with foetal bovine serum. Head kidney lymphocytes showed the highest proliferative response with 100 µg.mL-1 phytohaemagglutinin. With peripheral blood lymphocytes (heparin and EDTA), the best results were obtained with 50 µg.mL-1 pokeweed mitogen. The highest proliferation levels were detected with heparinized blood. Optimization of this assay contributes to an improved assessment of the rainbow trout immune system and its responses to various stimulants.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

40301 - Veterinary science

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2019

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů