Leishmania parasite detection and quantification using PCR-ELISA

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216208%3A11310%2F10%3A10082049" target="_blank" >RIV/00216208:11310/10:10082049 - isvavai.cz</a>

Nalezeny alternativní kódy

RIV/68378050:_____/10:00355298

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

angličtina

Název v původním jazyce

Leishmania parasite detection and quantification using PCR-ELISA

Popis výsledku v původním jazyce

This protocol describes an improved and optimized PCR-ELISA method for detection and quantification of Leishmania parasites in host tissues. Unlike other DNA-based assays, this method uses digoxigenin-and biotin-labeled primers. This eliminates the needfor a separate step of hybridization of the PCR product with labeled probes. The PCR product is detected using sandwich ELISA with antidigoxigenin-detecting antibodies. Primers are complementary to the kinetoplast minicircle conserved region of parasiteDNA, allowing the detection of several Leishmania species. For measurement of a wide range of parasite concentrations, +/- 25 cycles were optimal. the sensitivity of this technique is 0.3 fg of parasite DNA per reaction in 40-cycle PCR-ELISA, corresponding to 0.004 parasites. DNA preparation by a standard TRI reagent procedure takes about 4 h. When DNA is prepared, a single person can test a large number of samples (at least 150) in a maximum of 7 h.

Název v anglickém jazyce

Leishmania parasite detection and quantification using PCR-ELISA

Popis výsledku anglicky

This protocol describes an improved and optimized PCR-ELISA method for detection and quantification of Leishmania parasites in host tissues. Unlike other DNA-based assays, this method uses digoxigenin-and biotin-labeled primers. This eliminates the needfor a separate step of hybridization of the PCR product with labeled probes. The PCR product is detected using sandwich ELISA with antidigoxigenin-detecting antibodies. Primers are complementary to the kinetoplast minicircle conserved region of parasiteDNA, allowing the detection of several Leishmania species. For measurement of a wide range of parasite concentrations, +/- 25 cycles were optimal. the sensitivity of this technique is 0.3 fg of parasite DNA per reaction in 40-cycle PCR-ELISA, corresponding to 0.004 parasites. DNA preparation by a standard TRI reagent procedure takes about 4 h. When DNA is prepared, a single person can test a large number of samples (at least 150) in a maximum of 7 h.

Druh

J_x - Nezařazeno - Článek v odborném periodiku (Jimp, Jsc a Jost)

CEP obor

EB - Genetika a molekulární biologie

OECD FORD obor

—

Projekt

Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2010

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název periodika

Nature Protocols

ISSN

1754-2189

e-ISSN

—

Svazek periodika

5

Číslo periodika v rámci svazku

6

Stát vydavatele periodika

GB - Spojené království Velké Británie a Severního Irska

Počet stran výsledku

7

Strana od-do

—

Kód UT WoS článku

000278354700010

EID výsledku v databázi Scopus

—