Vše

Co hledáte?

Vše
Projekty
Výsledky výzkumu
Subjekty

Rychlé hledání

  • Projekty podpořené TA ČR
  • Významné projekty
  • Projekty s nejvyšší státní podporou
  • Aktuálně běžící projekty

Chytré vyhledávání

  • Takto najdu konkrétní +slovo
  • Takto z výsledků -slovo zcela vynechám
  • “Takto můžu najít celou frázi”

High-level expression and purification of soluble form of human natural killer cell receptor NKR-P1 in HEK293S GnTI- cells

Identifikátory výsledku

  • Kód výsledku v IS VaVaI

    <a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216208%3A11310%2F17%3A10360959" target="_blank" >RIV/00216208:11310/17:10360959 - isvavai.cz</a>

  • Nalezeny alternativní kódy

    RIV/61388971:_____/17:00489434

  • Výsledek na webu

    <a href="http://dx.doi.org/10.1016/j.pep.2017.07.016" target="_blank" >http://dx.doi.org/10.1016/j.pep.2017.07.016</a>

  • DOI - Digital Object Identifier

    <a href="http://dx.doi.org/10.1016/j.pep.2017.07.016" target="_blank" >10.1016/j.pep.2017.07.016</a>

Alternativní jazyky

  • Jazyk výsledku

    angličtina

  • Název v původním jazyce

    High-level expression and purification of soluble form of human natural killer cell receptor NKR-P1 in HEK293S GnTI- cells

  • Popis výsledku v původním jazyce

    Human natural killer receptor protein 1 (NKR-P1, CD161, gene klrb1) is a C-type lectin-like receptor of natural killer (NK) cells responsible for recognition of its cognate protein ligand lectin-like transcript 1 (LLT1). NKR-P1 is the single human orthologue of the prototypical rodent NKR-P1 receptors. Naturally, human NKR-P1 is expressed on the surface of NK cells, where it serves as inhibitory receptor; and on T and NKT cells functioning as co-stimulatory receptor promoting secretion of INFγ. Most notably, it is expressed on Th17 and Tc17 lymphocytes where presumably promotes targeting into LLT1 expressing immunologically privileged niches. We tested effect of different protein tags (SUMO, TRX, GST, MsyB) on expression of soluble NKR-P1 in E. coli. Then we optimized the expression construct of soluble NKR-P1 by preparing a library of expression constructs in pOPING vector containing the extracellular lectin-like domain with different length of the putative N-terminal stalk region and tested its expression in Sf9 and HEK293 cells. Finally, a high-level expression of soluble NKR P1 was achieved by stable expression in suspension-adapted HEK293S GnTI MINUS SIGN cells utilizing pOPINGTTneo expression vector. Purified soluble NKR-P1 is homogeneous, deglycosylatable, crystallizable and monomeric in solution, as shown by size-exclusion chromatography, multi-angle light scattering and analytical ultracentrifugation.

  • Název v anglickém jazyce

    High-level expression and purification of soluble form of human natural killer cell receptor NKR-P1 in HEK293S GnTI- cells

  • Popis výsledku anglicky

    Human natural killer receptor protein 1 (NKR-P1, CD161, gene klrb1) is a C-type lectin-like receptor of natural killer (NK) cells responsible for recognition of its cognate protein ligand lectin-like transcript 1 (LLT1). NKR-P1 is the single human orthologue of the prototypical rodent NKR-P1 receptors. Naturally, human NKR-P1 is expressed on the surface of NK cells, where it serves as inhibitory receptor; and on T and NKT cells functioning as co-stimulatory receptor promoting secretion of INFγ. Most notably, it is expressed on Th17 and Tc17 lymphocytes where presumably promotes targeting into LLT1 expressing immunologically privileged niches. We tested effect of different protein tags (SUMO, TRX, GST, MsyB) on expression of soluble NKR-P1 in E. coli. Then we optimized the expression construct of soluble NKR-P1 by preparing a library of expression constructs in pOPING vector containing the extracellular lectin-like domain with different length of the putative N-terminal stalk region and tested its expression in Sf9 and HEK293 cells. Finally, a high-level expression of soluble NKR P1 was achieved by stable expression in suspension-adapted HEK293S GnTI MINUS SIGN cells utilizing pOPINGTTneo expression vector. Purified soluble NKR-P1 is homogeneous, deglycosylatable, crystallizable and monomeric in solution, as shown by size-exclusion chromatography, multi-angle light scattering and analytical ultracentrifugation.

Klasifikace

  • Druh

    J<sub>imp</sub> - Článek v periodiku v databázi Web of Science

  • CEP obor

  • OECD FORD obor

    10608 - Biochemistry and molecular biology

Návaznosti výsledku

  • Projekt

    Výsledek vznikl pri realizaci vícero projektů. Více informací v záložce Projekty.

  • Návaznosti

    P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Ostatní

  • Rok uplatnění

    2017

  • Kód důvěrnosti údajů

    S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Údaje specifické pro druh výsledku

  • Název periodika

    Protein Expression and Purification

  • ISSN

    1046-5928

  • e-ISSN

  • Svazek periodika

    140

  • Číslo periodika v rámci svazku

    December 2017

  • Stát vydavatele periodika

    US - Spojené státy americké

  • Počet stran výsledku

    8

  • Strana od-do

    36-43

  • Kód UT WoS článku

    000411303200005

  • EID výsledku v databázi Scopus

    2-s2.0-85026659195