Příprava vzorku pro analýzu proteomu leukemických buněk BM2 dvourozměrnou elektroforézou

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216224%3A14310%2F04%3A00011469" target="_blank" >RIV/00216224:14310/04:00011469 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Příprava vzorku pro analýzu proteomu leukemických buněk BM2 dvourozměrnou elektroforézou

Popis výsledku v původním jazyce

Výsledek dvourozměrné elektroforézy (2D) proteinů výnamně závisí na způsobu přípravy vzorku. Cílem této práce bylo stanovit optimální podmínky pro přípravu vzorku kuřecích monoblastů transormovaných onkogenem v-myb. Modifikací lyzačního (9 M urea, 2 % NP-40, 3 % CHAPS, 70 mM DTT, 2 % ampholyte pH 8-10.5) a rehydratačního pufru (8 M urea, 4 % CHAPS, 100 mM DTT, 0.001 % bromphenol blue, 0.2 % ampholyte pH 3-10)přidáním thiomočoviny jsme zřetelně zvýšili počet proteinů rozlišitelných v 2D gelu. Sonikací vzorku jsme dále zvýšili počet a densitu proteinů na elektroforetogramu. Přítomnost thiomočoviny v lyzačním/rehydratačním pufru a sonikace zvýšila počet rozlišitelných proteinových skvrn přibližně osmkrát. Tyto experimentální podmínky použijeme při analýzeproteomu během diferenciace monoblastů BM2.

Název v anglickém jazyce

Sample preparation for proteom analysis of leukemic cells BM2 using two-dimensional electrophoresis

Popis výsledku anglicky

Quality of two-dimensional (2D) electrophoresis is dependent on the way of sample preparation. The aim of this study was to set up optimal conditions for preparation of the sample of v-myb-transformed chicken BM2 monoblasts to get a high number of resolved proteins in 2D gel. Starting composition of both lysis (9 M urea, 2 % NP-40, 3 % CHAPS, 70 mM DTT and 2 % ampholyte pH 8-10.5) and rehydratation buffers (8 M urea, 4 % CHAPS, 100 mM DTT, 0.001 % bromphenol blue and 0.2 % ampholyte pH 3-10) have been modified by addition of thiourea causing clear increase of the number of protein spots detectable in 2D gel. In addition, sonication of the sample further increased the number and density of resolved proteins. The presence of thiourea in the lysis/rehydratation buffers and sonication increased the number of protein spots resolved in 2D gel about 8-fold. These experimental conditions are going to be used in analysis of proteome during terminal differentiation of BM2 monoblasts.

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

FD - Onkologie a hematologie

OECD FORD obor

—

Projekt

<a href="/cs/project/GA301%2F03%2F1055" target="_blank" >GA301/03/1055: Studium molekulárních mechanismů způsobujících supresi v-Myb s využitím přístupů proteomiky</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)

Rok uplatnění

2004

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

1. česká proteomická konference

ISBN

—

ISSN

—

e-ISSN

—

Počet stran výsledku

1

Strana od-do

24

Název nakladatele

Středisko vědeckotechnických informací UŽFG AV ČR

Místo vydání

Mělník

Místo konání akce

Mělník

Datum konání akce

15. 6. 2004

Typ akce podle státní příslušnosti

CST - Celostátní akce

Kód UT WoS článku

—