Zobrazovací imunohistochemická metoda pro značení řezů sferoidů s využitím zlatých nanočástic pomocí laserové ablace a hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F00216224%3A14310%2F21%3A00119491" target="_blank" >RIV/00216224:14310/21:00119491 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

Zobrazovací imunohistochemická metoda pro značení řezů sferoidů s využitím zlatých nanočástic pomocí laserové ablace a hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem

Popis výsledku v původním jazyce

Sferoidy jsou používané 3D buňkové modely, které dokáží reprezentovat skutečné prostředí nádorové tkáně. Jsou tak dobrým modelem pro imunohistochemické (IHC) značení a 2D nebo 3D zobrazování cílového proteinu v řezech tkání. Rozložení proliferujících buněk ve vnějších částech, kde je dostatek živin a kyslíku, a výskytem nekrotických buněk blíže středu sferoidu tedy připomíná mikroprostředí nádoru. Jedním z markerů proliferace je protein Ki-67, na jehož detekci pomocí fluorescenční mikroskopie se rutinně používá značení primární a sekundární protilátkou s fluoroforem. Často je také využívána tvorba velmi pevné vazby avidin-biotin, kdy je jeden z partnerů označen detekční značkou. Označením proteinu Ki-67 pomocí zlaté nanočástice (AuNP) o definované velikosti umožňuje vysoce citlivé stanovení tohoto markeru pomocí laserové ablace spojené s hmotnostní spektrometrií s indukčně vázanou plazmou (LA ICP MS). V tomto příspěvku je popsán vývoj metody IHC značení řezů sferoidu tvořených buňkami adenokarcinomu tlustého střeva z linie HT-29. Pozornost je věnována zejména eliminaci nespecifických interakcí nanočástic pomocí proteinových či neproteinových blokačních roztoků. Jsou využity 20nm AuNP s adsorbovaným nebo kovalentně navázaným streptavidinem.

Název v anglickém jazyce

Imaging immunohistochemical method for labeling spheroid sections using gold nanoparticles by laser ablation and inductively coupled plasma mass spectrometry

Popis výsledku anglicky

Spheroids are used 3D cell models that can represent the actual environment of the tumor tissue. Thus, they are a good model for immunohistochemical (IHC) labeling and 2D or 3D imaging of the target protein in tissue sections. The distribution of proliferating cells in the outer parts, where nutrients and oxygen are abundant, and the occurrence of necrotic cells closer to the center of the spheroid thus resemble the tumor microenvironment. One marker of proliferation is the Ki-67 protein, for the detection of which fluorescence microscopy is routinely used to label primary and secondary antibodies with a fluorophore. The formation of a very tight avidin-biotin bond is also often used, where one of the partners is labeled with a detection tag. Labelling the Ki-67 protein with a gold nanoparticle (AuNP) of defined size allows highly sensitive determination of this marker by laser ablation coupled to inductively coupled plasma mass spectrometry (LA ICP MS). In this paper, the development of an IHC labeling method for spheroid sections formed by colon adenocarcinoma cells from the HT-29 line is described. In particular, attention is paid to the elimination of non-specific nanoparticle interactions using protein or non-protein blocking solutions. 20nm AuNPs with adsorbed or covalently bound streptavidin are used.

Druh

O - Ostatní výsledky

CEP obor

—

OECD FORD obor

10406 - Analytical chemistry

Projekt

<a href="/cs/project/GA21-12262S" target="_blank" >GA21-12262S: Nanočásticové sondy pro zobrazovací hmotnostní spektrometrii</a><br>

Návaznosti

P - Projekt vyzkumu a vyvoje financovany z verejnych zdroju (s odkazem do CEP)<br>S - Specificky vyzkum na vysokych skolach

Rok uplatnění

2021

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů