EXPRESE NESTRUKTURÁLNÍCH PROTEINŮ MOP-TOP VIRU BRAMBORU V BAKTERIÁLNÍM SYSTÉMU

Kód výsledku v IS VaVaI

<a href="https://www.isvavai.cz/riv?ss=detail&h=RIV%2F60460709%3A41210%2F03%3A00005582" target="_blank" >RIV/60460709:41210/03:00005582 - isvavai.cz</a>

Výsledek na webu

—

DOI - Digital Object Identifier

—

Jazyk výsledku

čeština

Název v původním jazyce

EXPRESE NESTRUKTURÁLNÍCH PROTEINŮ MOP-TOP VIRU BRAMBORU V BAKTERIÁLNÍM SYSTÉMU

Popis výsledku v původním jazyce

RNA 1 PMTV byla rozdělena do šesti částí ve velikostech přibližně 1 kb a byla zaklonována do pUC-57A, ve kterém byla osekvenována. Sekvence vykazovaly vysokou míru homologie (GenBank AY196959). Veškeré fragmenty genů byly vloženy do různých expresních vektorů. Nejprve byly používány vektory, ve kterých jsme exprimovali nativní protein, pMPM-?-4,5,6, pTH a pET 21a+, tj. bez přidané kotvy. Pro usnadnění detekce byly v dalších experimentech použity vektory s detekční kotvou, a to GST a 6x His. Fúzní proteiny s GST byly exprimovány ve vektorech pGEX-4T-1,2 a pGEX-KG, kde přidaná kotva je odštěpitelná pomocí trombinu. Proteiny PMTV ve spojení s histidinovou kotvou, 6x His, byly exprimovány ve vektorech pQE-40 a pQE-60. Největší výtěžek rekombinantního proteinu byl zaznamenán v expresi z vektoru pGEX-4T-2 v buňkách BL 21. Nevýhoda tohoto systému spočívá v neúplném štěpení GST trombinem. Jako vhodnější vektory se proto ukazují pQE-40 a pQE-60, protože 6x His se nenachází v rostlinném pletivu

Název v anglickém jazyce

EXPRESSION OF NON-STRUCTURAL PROTEINS OF POTATO MOP-TOP VIRUS IN PROCARYOTIC SYSTEM

Popis výsledku anglicky

PMTV RNA 1 was divided into 6 parts with the length 1 kb aproximately, and these fragments were inserted into pUC-57A suitable for sequencing. The obtained sequences showed high homology (GenBank AY196959). All fragments were inserted into different expression vectors. First of all we used the non-tagged expression vectors, PMPM-?-4, 5, 6; pET-21a+ and pTH. To facilitate detection of expressed proteins we used tagged vectors - either with His tag or glutation S-transferase (GST). GST fusion protein wasperformed in vectors pGEX-4T-1, 2 and pGEX-KG alowing the removing of tag by thrombin. Proteins with His tag were induced in vectors pQE-40 and pQE-60. The highest yield of expressed protein was obtained from pGEX-4T-2 in E. coli BL 21. Disadvantageof this aproach was uncomplete cleavage of GST by thrombin. We consider pQE-40 and pQE-60 as more suitable vectors for the purpose of production of polyclonal antibodies against PMTV proteins, because sequence of tag 6xHis has not been found i

Druh

D - Stať ve sborníku

CEP obor

GF - Choroby, škůdci, plevely a ochrana rostlin

OECD FORD obor

—

Projekt

—

Návaznosti

Z - Vyzkumny zamer (s odkazem do CEZ)

Rok uplatnění

2003

Kód důvěrnosti údajů

S - Úplné a pravdivé údaje o projektu nepodléhají ochraně podle zvláštních právních předpisů

Název statě ve sborníku

Zborník - abstraktov XVI. Slovenská a česká konferencia o ochrane rastlín

ISBN

80-8069-235-1

ISSN

—

e-ISSN

—

Počet stran výsledku

2

Strana od-do

36-37

Název nakladatele

Slovenská polnohospodárska univerzita

Místo vydání

Nitra

Místo konání akce

Nitra

Datum konání akce

1. 1. 2003

Typ akce podle státní příslušnosti

CST - Celostátní akce

Kód UT WoS článku

—